BspQI
يمكن التعبير عن BspQI بشكل متجانس في الإشريكية القولونية التي يمكنها التعرف على مواقع محددة ويتم إنتاجها بموجبها
BspQI، وهو نوكلياز داخلي مقيد لتقييد IIs، مشتق من سلالة E. coli المؤتلفة التي تحمل جين BspQI المستنسخ والمعدل من Bacillus sphaericus.ويمكنه التعرف على مواقع محددة، وتكون مواقع تسلسل التعرف والانقسام كما يلي:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
مواصفات المنتج
1. نشاط عالي، وسرعة الهضم؛
2. نشاط نجمي منخفض، مما يضمن قطعًا دقيقًا مثل "المشرط"؛
3. بدون BSA وخالي من أصل حيواني.
حساسية الميثيل
Dأنا مثيلة:غير حساسة؛
Dسم مثيلة:غير حساسة؛
مثيلة CpG:غير حساسة؛
شروط التخزين
يجب شحن المنتج عند درجة حرارة ≥ 0 درجة مئوية؛يُخزن في حالة -25~-15 درجة مئوية.
المخزن المؤقت للتخزين
20 مللي مولار تريس-حمض الهيدروكلوريك، 0.1 مللي مولار EDTA، 500 مللي مولار بوكل، 1.0 مللي مولار دايثيوثريتول، 500 ميكروجرام/مل ألبومين مؤتلف، 0.1% Trition X-100 و50% جلسرين (درجة الحموضة 7.0 عند 25 درجة مئوية).
تعريف الوحدة
يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية الإنزيم المطلوبة لهضم 1 ميكروجرام من الحمض النووي للتحكم الداخلي في ساعة واحدة عند 50 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر.
رقابة جودة
فحص نقاء البروتين (SDS-PAGE):تم تحديد نقاء BspQI بنسبة ≥95٪ من خلال تحليل SDS-PAGE.
رناسي:10U من BspQI مع 1.6 ميكروغرام MS2 RNA لمدة 4 ساعات عند 50 درجة مئوية لا ينتج عنه أي تدهور كما هو محدد بواسطة الفصل الكهربائي لهلام الاغاروز.
نشاط DNase غير محدد:10U من BspQI مع 1 ميكروجرام من الحمض النووي عند 50 درجة مئوية لمدة 16 ساعة، مقارنة بـ 50 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة، لا ينتج عنها أي حمض نووي زائد كما هو محدد بواسطة الفصل الكهربائي لهلام الاغاروز.
الربط والقطع:بعد هضم 1 ميكروجرام من LADNA مع 10U BspQI، يمكن ربط أجزاء DNA باستخدام ligase T4 DNA عند 16 درجة مئوية.ويمكن إعادة قطع هذه الأجزاء المرتبطة باستخدام BspQI.
بكتريا قولونية الحمض النووي: أظهر اكتشاف TaqMan qPCR الخاص بـ E. coli 16s rDNA أن بقايا جينوم E.coli ≥ 0.1pg/ul.
بقايا البروتين المضيف:≥ 50 جزء في المليون
بكتيرية السموم الداخلية: اختبار LAL، وفقًا لدستور الأدوية الصيني IV طبعة 2020، طريقة اختبار حدود الهلام، القاعدة العامة (1143).يجب أن يكون محتوى السموم الداخلية البكتيرية ≥10 EU/mg.
نظام التفاعل وشروطه
| عنصر | مقدار |
| BspQ أنا (10 وحدة/ميكروليتر) | 1 ميكرولتر |
| الحمض النووي | 1 ميكروجرام |
| 10 × BspQ I عازلة | 5 ميكرولتر |
| د H2O | ما يصل إلى 50 ميكرولتر |
ظروف التفاعل: 50 درجة مئوية, 1 ~ 16 ساعة.
تعطيل الحرارة: 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
يمكن لنظام وظروف التفاعل الموصى بها أن توفر تأثيرًا جيدًا نسبيًا على هضم الإنزيم، وهو كمرجع فقط، يرجى الرجوع إلى النتائج التجريبية للحصول على التفاصيل.
تطبيق المنتج
تقييد هضم نوكلياز، الاستنساخ السريع.
ملحوظات
1. حجم الإنزيم ≥ 1/10 من حجم التفاعل.
2. قد يحدث النشاط النجمي عندما يكون تركيز الجلسرين أكثر من 5%.
3. قد يحدث نشاط الانقسام عندما تكون الركيزة أقل من النسبة الموصى بها.
