الدناز أنا
DNase I (Deoxyribonuclease I) هو إندووكسيريبونوكلياز داخلي يمكنه هضم الحمض النووي المفرد أو المزدوج.يتعرف ويشق روابط فوسفوديستر لإنتاج نيوكليوتيدات أحادية أو أوليغوديوكسي نيوكليوتيدات مفردة أو مزدوجة الجديلة مع مجموعات الفوسفات عند الطرف 5′ والهيدروكسيل عند الطرف 3′.يعتمد نشاط DNase I على Ca2+ ويمكن تنشيطه بواسطة أيونات المعادن ثنائية التكافؤ مثل Mn2+ وZn2+.5 ملم Ca2 + يحمي الإنزيم من التحلل المائي.في وجود Mg2+، يمكن للإنزيم التعرف بشكل عشوائي على أي موقع على أي شريط من الحمض النووي وتقسيمه.في وجود Mn2 +، يمكن التعرف على الخيوط المزدوجة من الحمض النووي في وقت واحد وتقسيمها في نفس الموقع تقريبًا لتكوين شظايا الحمض النووي ذات النهاية المسطحة أو شظايا الحمض النووي ذات النهاية اللزجة مع 1-2 نيوكليوتيدات بارزة.
خاصية المنتج
تم التعبير عن DNase البنكرياس البقري في نظام تعبير الخميرة وتنقيته.
Cمكونات
| عنصر | مقدار | |||
| 0.1كو | 1كو | 5كو | 50كو | |
| DNase I، خالي من RNase | 20 ميكرولتر | 200 ميكرولتر | 1 مل | 10 مل |
| 10×DNase أنا العازلة | 1 مل | 1 مل | 5 × 1 مل | 5 × 10 مل |
النقل والتخزين
1. استقرار التخزين: - 15 درجة مئوية ~ -25 درجة مئوية للتخزين؛
2. استقرار النقل: النقل تحت عبوات الثلج.
3. الموردة في: 10 ملم تريس، حمض الهيدروكلوريك، 2 ملم CaCl2، 50% جلسرين، درجة حموضة 7.6 عند 25 درجة مئوية.
تعريف الوحدة
يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية الإنزيم التي ستتحلل تمامًا 1 ميكروجرام من الحمض النووي pBR322 خلال 10 دقائق عند 37 درجة مئوية.
رقابة جودة
رناسي:5U من DNase I مع 1.6 ميكروغرام MS2 RNA لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية لا ينتج عنه أي تدهور على النحو الذي يحدده الفصل الكهربائي لهلام الاغاروز.
بكتيرية السموم الداخلية:اختبار LAL، وفقًا لدستور الأدوية الصيني IV طبعة 2020، طريقة اختبار حدود الهلام، القاعدة العامة (1143).يجب أن يكون محتوى السموم الداخلية البكتيرية ≥10 EU/mg.
تعليمات الاستخدام
1. قم بإعداد محلول التفاعل في الأنبوب الخالي من RNase وفقًا للنسب المذكورة أدناه:
| عنصر | مقدار |
| الحمض النووي الريبي | X ميكروغرام |
| 10 × الدناز أنا العازلة | 1 ميكرولتر |
| DNase I، خالي من RNase (5U/μL) | 1 يو لكل ميكروغرام من الحمض النووي الريبي (RNA). |
| ddH2O | ما يصل إلى 10 ميكرولتر |
2.37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة؛
3. أضف المخزن المؤقت للإنهاء لإيقاف التفاعل، وقم بتسخينه عند 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق لتعطيل نشاط DNase I. ويمكن استخدام العينة مباشرة لتجربة النسخ التالية.
ملحوظات
1. استخدم 1U DNase I لكل ميكروغرام من الحمض النووي الريبي (RNA)، أو 1U DNase I لأقل من 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي (RNA).
2. ينبغي إضافة EDTA إلى تركيز نهائي قدره 5 ملم لحماية الحمض النووي الريبي (RNA) من التدهور أثناء تعطيل الإنزيم.
