الترا نوكلياز
UltraNuclease عبارة عن نوكلياز نوكلياز معدل وراثيًا مشتق من Serratia marcescens، وهو قادر على تحليل الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي (RNA)، سواء كان مزدوجًا أو منفردًا، خطيًا أو دائريًا في نطاق واسع من الحالات، ويتحلل الأحماض النووية تمامًا إلى أليغنوكليوتيدات أحادية الفوسفات 5' بطول 3-5 قاعدة. .بعد تعديل الهندسة الوراثية، تم تخمير المنتج، والتعبير عنه، وتنقيته في الإشريكية القولونية (E. coli)، مما يقلل من لزوجة طاف الخلية ومحللة الخلية في البحث العلمي، ولكنه أيضًا يحسن كفاءة التنقية والبحث الوظيفي للبروتين.ويمكن استخدامه أيضًا في العلاج الجيني وتنقية الفيروسات وإنتاج اللقاحات وصناعة الأدوية البروتينية والسكاريد ككاشف لإزالة بقايا الحمض النووي المضيف.
مواصفات المنتج
| CAS رقم. | 9025-65-4 |
| رقم المفوضية الأوروبية | |
| الوزن الجزيئي الغرامي | 30 كيلو دالتون |
| نقطة تساوي الكهربية | 6.85 |
| نقاء البروتين | ≥99% (SDS-PAGE وSEC-HPLC) |
| نشاط معين | ≥1.1 × 106U/مجم |
| درجة الحرارة المثلى | 37 درجة مئوية |
| الرقم الهيدروجيني الأمثل | 8.0 |
| نشاط البروتياز | سلبي |
| العبء الحيوي | <10CFU/100,000U |
| بروتين الخلية المضيفة المتبقية | ≥10 جزء في المليون |
| معدن ثقيل | ≥10 جزء في المليون |
| السموم الداخلية البكتيرية | <0.25الاتحاد الأوروبي/1000U |
| المخزن المؤقت للتخزين | 20 مللي مولار تريس-حمض الهيدروكلوريك، الرقم الهيدروجيني 8.0، 2 مللي مولار MgCl2، 20 مللي مولار كلوريد الصوديوم، 50% جلسرين |
شروط التخزين
النقل ≥0 درجة مئوية؛ -25 ~ -15 درجة مئوية التخزين، صلاحية سنتين (تجنب ذوبان التجميد).
تعريف الوحدة
تم تعريف كمية الإنزيم المستخدمة لتغيير قيمة الامتصاص لـ △A260 بمقدار 1.0 خلال 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، ودرجة الحموضة 8.0، أي ما يعادل 37 ميكروغرام من DNA الحيوانات المنوية المهضومة عن طريق القطع إلى أليغنوكليوتيدات، على أنها وحدة نشطة (U).
رقابة جودة
بروتين الخلية المضيفة المتبقية: مجموعة إليسا
•البروتياز بقايا: تفاعل UltraNuclease 250KU/mL مع الركيزة لمدة 60 دقيقة، ولم يتم اكتشاف أي نشاط.
•السموم الداخلية البكتيرية: اختبار LAL، دستور الأدوية لجمهورية الصين الشعبية، المجلد 4 (إصدار 2020) طريقة اختبار الحد الهلامي.قواعد عامة (1143).
•العبء الحيوي: دستور الأدوية لجمهورية الصين الشعبية المجلد 4 (طبعة 2020) - عام
قواعد اختبار العقم (1101)، المعيار الوطني لجمهورية الصين الشعبية، GB 4789.2-2016.
•معدن ثقيل:برنامج المقارنات الدولية-AES، HJ776-2015.
عملية
تم تثبيط نشاط UltraNuclease بشكل ملحوظ عندما كان تركيز SDS يزيد عن 0.1٪ أو EDTA
كان التركيز أكثر من 1 ملم. لم يكن للفاعل بالسطح Triton X- 100 وTween 20 وTween 80 أي تأثير على النيوكلياز.
الخصائص عندما يكون التركيز أقل من 1.5%.
| عملية | التشغيل الأمثل | عملية صالحة |
| درجة حرارة | 37 درجة مئوية | 0-45 درجة مئوية |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| ملغ2+ | 1-2 مم | 1- 15 ملم |
| دي تي تي | 0- 100 ملم | > 100 ملم |
| 2-ميركابتوإيثانول | 0- 100 ملم | > 100 ملم |
| أيون معدن أحادي التكافؤ (نا+، ك+ الخ.) | 0-20 ملم | 0-200 مم |
| PO43- | 0- 10 ملم | 0- 100 ملم |
الاستخدام والجرعة
• إزالة الحمض النووي الخارجي من منتجات اللقاحات، والحد من مخاطر تسمم الحمض النووي المتبقي وتحسين سلامة المنتج.
• تقليل لزوجة سائل التغذية الناتج عن الحمض النووي، وتقصير وقت المعالجة وزيادة إنتاج البروتين.
• إزالة الحمض النووي الذي يغلف الجسيمات (الفيروس، الجسم المتضمن، وما إلى ذلك)، وهو أمر يفضي إلى ذلك
لإطلاق وتنقية الجسيمات.
| النوع التجريبي | إنتاج البروتين | فيروس، لقاح | أدوية الخلايا |
| رقم الخلايا | 1 جرام من الوزن الرطب للخلية (معلق مع 10 مل عازلة) | 1 لتر تخمير طاف السائل | ثقافة 1 لتر |
| الحد الأدنى للجرعة | 250U | 100U | 100U |
| الجرعة الموصى بها | 2500U | 25000U | 5000U |
• يمكن أن يؤدي العلاج بالنيوكلياز إلى تحسين دقة العينة واستعادتها لإجراء تحليل كروماتوغرافي للعمود، والرحلان الكهربائي، والتحليل النشاف.
• في العلاج الجيني، تتم إزالة الحمض النووي للحصول على الفيروسات الغدية المنقاة.
