Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (خالي من الجلسرين)

يُشتق Bst DNA بوليميريز V2 من Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I، الذي يحتوي على نشاط بوليميريز الحمض النووي 5′→3′ ونشاط استبدال قوي للسلسلة، ولكن لا يوجد نشاط نوكلياز خارجي 5′→3′.يعتبر Bst DNA Polymerase V2 مناسبًا بشكل مثالي لإزاحة الخيوط والتضخيم متساوي الحرارة LAMP (تضخيم متساوي الحرارة بوساطة حلقة) والتسلسل السريع.Bst DNApolymerase V2 هو إصدار سريع البدء يعتمد على Bst DNApolymerase V2 (HC5005A) الذي تم الحصول عليه عن طريق تقنية التعديل العكسي، والتي يمكن أن تمنع نشاط بوليميريز DNA في درجة حرارة الغرفة، لذلك يمكن تشغيل نظام التفاعل وصياغته في درجة حرارة الغرفة لمنع عدم -تضخيم محدد وتحسين كفاءة التفاعل، ويمكن تجفيف هذا الإصدار بالتجميد.بالإضافة إلى ذلك، يتم إطلاق نشاطه عند درجات حرارة عالية، لذلك ليست هناك حاجة لخطوة تنشيط منفصلة.

عناصر

Bst DNA بوليميريز V2 (خالي من الجلسرين) (8U/ميكرولتر)

التطبيقات

1.LAMP تضخيم متساوي الحرارة

2.تفاعل إزاحة مفردة لشريط DNA

3.ارتفاع تسلسل الجينات GC

4.تسلسل الحمض النووي لمستوى النانوجرام.

حالة التخزين

النقل تحت 0 درجة مئوية ويتم تخزينه في -25 درجة مئوية ~ -15 درجة مئوية.

تعريف الوحدة

يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية الإنزيم الذي يدمج 25 نانومول من dNTP في مادة حمضية غير قابلة للذوبان في 30 دقيقة عند 65 درجة مئوية.

رقابة جودة

1.فحص نقاء البروتين (SDS-PAGE):يتم تحديد نقاء بوليميريز الحمض النووي Bst V2 بنسبة ≥99% عن طريق تحليل SDS-PAGE باستخدام اكتشاف Coomassie Blue.

2.Eنوكليازنشاط:حضانة تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على ما لا يقل عن 8 U من بوليميريز الحمض النووي Bst V2 مع 1 ميكروغرام αDNA لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية لا يؤدي إلى أي تدهور يمكن اكتشافه كما هو محدد.

3.نشاط نوكلياز:حضانة تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على ما لا يقل عن 8 U من بوليميريز الحمض النووي Bst V2 مع 1 ميكروغرام α -Hind Ⅲ لهضم الحمض النووي لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية لا يؤدي إلى أي تدهور يمكن اكتشافه كما هو محدد.

4.نشاط نيكاس:إن حضانة تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على ما لا يقل عن 8 وحدات من بوليميريز الحمض النووي Bst V2 مع 1 ميكروغرام من الحمض النووي pBR322 لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية لا يؤدي إلى أي تدهور يمكن اكتشافه كما هو محدد.

5.نشاط ريبونوكلياز:إن حضانة تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على ما لا يقل عن 8 وحدات من بوليميريز الحمض النووي Bst V2 مع 1.6 ميكروغرام MS2 RNA لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية لا يؤدي إلى أي تدهور يمكن اكتشافه كما هو محدد.

6.بكتريا قولونيةالحمض النووي:يتم فحص 120 وحدة من بوليميريز الحمض النووي Bst V2 بحثًا عن وجود الحمض النووي الجيني للإشريكية القولونية باستخدام TaqMan qPCR مع الاشعال الخاصة بموضع الرنا الريباسي E. coli 16S.تلوث الحمض النووي الجينومي لـ E. coli هو ≥1 نسخة.

رد فعل المصباح

ملحوظات:

1) أ.SYTOTM 16 Green (25×): وفقًا للاحتياجات التجريبية، يمكن استخدام أصباغ أخرى كبدائل؛

2) ب.مزيج التمهيدي: تم الحصول عليه عن طريق خلط 20 ميكرومتر FIP، 20 ميكرومتر BIP، 2.5 ميكرومتر F3، 2.5 ميكرومتر B3، 5 ميكرومتر LF، 5 ميكرومتر LB وأحجام أخرى.

رد الفعل والحالة

1 × HC Bst V2 Buffer، تتراوح درجة حرارة الحضانة بين 60 درجة مئوية و65 درجة مئوية.

تعطيل الحرارة

 80 درجة مئوية، 20 دقيقة