مجموعة إليسا CHO HCP
يتم استخدام طريقة ELISA ذات الامتصاص المناعي بخطوة واحدة في هذا الاختبار.تتفاعل العينات التي تحتوي على CHOK1 HCP في وقت واحد مع الجسم المضاد لـ CHOK1 الماعز المسمى HRP والجسم المضاد لـ CHOK1 المطلي على لوحة ELISA، وتشكل أخيرًا مركبًا شطيرة من الجسم المضاد ذو الطور الصلب-الجسم المضاد المسمى HCP.يمكن إزالة الجسم المضاد غير المنضم عن طريق غسل لوحة ELISA.يتم إضافة الركيزة TMB إلى البئر للحصول على رد فعل كاف.يتم إيقاف تطور اللون بعد إضافة محلول الإيقاف، وتتم قراءة قيمة OD أو قيمة الامتصاص لمحلول التفاعل عند 450/650 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية.تتناسب قيمة OD أو قيمة الامتصاص مع محتوى HCP في المحلول.من هذا، يمكن حساب تركيز HCP في المحلول وفقًا للمنحنى القياسي.
طلب
يتم استخدام هذه المجموعة للكشف الكمي عن محتوى بقايا بروتين الخلية المضيفة CHOK1 في العينات.
Cمكونات
| S/N | عنصر | تركيز | شروط التخزين |
| 1 | معيار CHOK1 HCP | 0.5 ملغم/مل | ≥–20 درجة مئوية |
| 2 | مكافحة CHO HCP-HRP | 0.5 ملغم/مل | ≥–20 درجة مئوية، محمي من الضوء |
| 3 | تمب | NA | 2-8 درجة مئوية، محمي من الضوء |
| 4 | 20 × ببست 0.05% | NA | 2-8 درجة مئوية |
| 5 | وقف الحل | NA | RT |
| 6 | سدادات الصفائح الدقيقة | NA | RT |
| 7 | جيش صرب البوسنة | NA | 2-8 درجة مئوية |
| 8 | ألواح طلاء مسبق عالية الامتصاص | NA | 2-8 درجة مئوية |
المعدات المطلوبة
| المواد الاستهلاكية / المعدات | صناعة | فهرس |
| القارئ صفيحة | الأجهزة الجزيئية | Spectra Max M5 أو M5e أو ما يعادلها |
| خلاط حراري | إيبندورف | إيبندورف/5355 أو ما يعادله |
| خلاط دوامة | إيكا | MS3 رقمي أو ما يعادله |
التخزين والاستقرار
1.النقل عند -25~-15 درجة مئوية.
2.شروط التخزين كما هو مبين في الجدول 1؛يتم تخزين المكونات 1-2 ≥–20 درجة مئوية، ويتم تخزين 5-6 RT،3、4、7、8 يتم تخزينها في 2-8 درجة مئوية؛فترة الصلاحية 12 شهرا.
معلمات المنتج
1.الحساسية: 1 نانوجرام/مل
2.نطاق الكشف: 3 - 100 نانوغرام/مل
3.الدقة: السيرة الذاتية داخل الاختبار ≥ 10%، السيرة الذاتية بين الاختبار ≥ 15%
4.تغطية HCP: >80%
5.الخصوصية: هذه المجموعة عالمية لأنها تتفاعل بشكل خاص مع CHOK1 HCP بشكل مستقل عن عملية التنقية.
إعداد الكاشف
1.ببست 0.05%
خذ 15 مل من 20×PBST 0.05%، مخفف في ddH2O، وتصل إلى 300 مل.
2.1.0% جيش صرب البوسنة
خذ 1 جرام من BSA من الزجاجة وخففه في 100 مل من PBST 0.05%، واخلطه جيدًا حتى يذوب تمامًا، وخزنه في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية.المخزن المؤقت للتخفيف المجهز صالح لمدة 7 أيام.يوصى بالتحضير حسب الحاجة.
3.محلول الكشف 2 ميكروجرام/مل
خذ 48 ميكرولتر من 0.5 ملغ/مل Anti-CHO HCP-HRP وخففه في 11,952 ميكرولتر من 1% BSA للحصول على تركيز نهائي لمحلول الكشف 2 ميكروغرام/مل.
4.مراقبة الجودة وإعداد معايير CHOK1 HCP
| أنبوب لا. | إبداعي | تركيز | مقدار | 1% جيش صرب البوسنة | الحجم الكلي | أخير |
| A | معيار | 0.5 ملغم/مل | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
الجدول: إعداد مراقبة الجودة والمعايير
إجراء الفحص
1.تحضير الكواشف كما هو مبين في "تحضير الكاشف" أعلاه.
2.خذ 50 ميكرولتر من المعايير والعينات ومراقبة الجودة (راجع الجدول 3) في كل بئر، ثم أضف 100 ميكرولتر من محلول الكشف (2 ميكروجرام/مل)؛قم بتغطية اللوحة بمادة مانعة للتسرب، ثم ضع لوحة ELISA على الخلاط الحراري.احتضان عند 500 دورة في الدقيقة، 25 ± 3 درجة مئوية لمدة ساعتين.
3.عكس صفيحة ميكروسكوبية في الحوض وتجاهل الحل الطلاء.ماصة 300 ميكرولتر من PBST 0.05٪ في كل بئر لغسل لوحة ELISA والتخلص من المحلول، وكرر الغسيل 3 مرات.اقلب اللوحة على منشفة ورقية نظيفة واتركها حتى تجف.
4.أضف 100 ميكرولتر من الركيزة TMB (انظر الجدول 1) إلى كل بئر، وأغلق لوحة ELISA، واحتضنها في الظلام عند درجة حرارة 25±3°C لمدة 15 دقيقة.
5.ماصة 100 ميكرولتر من محلول التوقف في كل بئر.
6.قياس الامتصاصية عند الطول الموجي 450/650 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة.
7.تحليل البيانات بواسطة SoftMax أو برنامج مماثل.رسم المنحنى القياسي باستخدام نموذج الانحدار اللوجستي ذو أربعة معلمات.
مثال المنحنى القياسي
ملاحظة: إذا تجاوز تركيز HCP في العينة الحد الأعلى للمنحنى القياسي، فيجب تخفيفه بشكل صحيح باستخدام المخزن المؤقت المخفف قبل الاختبار.
ملحوظات
محلول الإيقاف هو 2M من حمض الكبريتيك، يرجى التعامل معه بحذر لتجنب تناثر السوائل!
