مجموعة التنميط الجيني للماوس

رقم القط: HCR2021A

هذا المنتج عبارة عن مجموعة مصممة للتعرف السريع على الأنماط الجينية للفأر، بما في ذلك استخراج خام الحمض النووي ونظام تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.يمكن استخدام المنتج لتضخيم PCR مباشرة من ذيل الفأر والأذن وأخمص القدمين والأنسجة الأخرى بعد انقسام بسيط بواسطة Lysis Buffer وProteinase k.لا يوجد هضم بين عشية وضحاها، أو استخراج الفينول كلوروفورم أو تنقية العمود، وهو أمر بسيط ويقلل من الوقت الذي تستغرقه التجارب.المنتج مناسب لتضخيم الأجزاء المستهدفة حتى 2 كيلو بايت وتفاعلات PCR المتعددة مع ما يصل إلى 3 أزواج من الاشعال.يحتوي مزيج 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix على بوليميراز الحمض النووي المعدل وراثيًا، Mg²⁺و dNTPs ونظام عازل محسّن لتوفير كفاءة تضخيم عالية وتحمل مثبط، بحيث يمكن تنفيذ تفاعلات PCR عن طريق إضافة القالب والبادئات وإعادة ترطيب المنتج إلى 1 ×.يحتوي منتج PCR المضخم بهذا المنتج على قاعدة "A" بارزة في الطرف 3′ ويمكن استخدامه مباشرة لاستنساخ TA بعد التنقية.

عناصر

شروط التخزين

يجب تخزين المنتجات في درجة حرارة -25 إلى -15 درجة مئوية لمدة عامين.بعد الذوبان، يمكن تخزين Lysis Buffer في درجة حرارة 2 ~ 8 درجة مئوية للاستخدام المتعدد على المدى القصير، وخلطه جيدًا عند الاستخدام.

طلب

هذا المنتج مناسب لتحليل خروج الفأرة، والكشف عن الجينات المحورة، والتنميط الجيني، وما إلى ذلك.

سمات

1.عملية بسيطة: لا حاجة لاستخراج الحمض النووي الجينومي؛

2.تطبيق واسع: مناسب للتضخيم المباشر لأنسجة الفأر المختلفة.

تعليمات

1.الافراج عن الحمض النووي الجينومي

1) إعداد المحللة

يتم تحضير محللة الأنسجة وفقًا لعدد عينات الفأر المراد تحليلها (يجب تحضير محللة الأنسجة في الموقع وفقًا للجرعة وخلطها جيدًا للاستخدام)، وتكون نسبة الكواشف المطلوبة لعينة واحدة كما يلي:

2) إعداد العينات وتحلل

الاستخدام الموصى به للأنسجة

خذ كمية مناسبة من عينات أنسجة الفأر في أنابيب الطرد المركزي النظيفة، وأضف 200 ميكرولتر من محلول الأنسجة الطازجة إلى كل أنبوب طرد مركزي، ودوّمها ورجها، ثم احضنها عند 55 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، ثم سخنها عند 98 درجة مئوية لمدة 3 دقائق.

3) الطرد المركزي

هز جيدا المحللة وأجهزة الطرد المركزي عند 12000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق.يمكن استخدام المادة طافية كقالب لتضخيم PCR.إذا كان القالب مطلوبًا للتخزين، قم بنقل المادة طافية إلى أنبوب طرد مركزي معقم آخر وتخزينها عند -20 درجة مئوية لمدة أسبوعين.

2.تضخيم PCR

إزالة 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix من -20 درجة مئوية وذوبان الجليد على الجليد، مزيج رأسا على عقب وإعداد نظام تفاعل PCR وفقا للجدول التالي (تعمل على الجليد):

ملحوظة:

أ) يجب ألا يتجاوز المبلغ المضاف 1/10 من النظام، وإذا تمت إضافة الكثير، فقد يتم منع تضخيم PCR.

شروط PCR الموصى بها

ملحوظة:

أ) درجة حرارة التلدين: بالرجوع إلى قيمة Tm للمادة التمهيدية، يوصى بضبط درجة حرارة التلدين على قيمة Tm الأصغر للمادة التمهيدية +3~5°C.

المشاكل والحلول المشتركة

1.لا توجد شرائط مستهدفة

1) منتج التحلل المفرط.اختر الكمية الأنسب من القالب، والتي لا تزيد عادة عن 1/10 من النظام؛

2) حجم العينة كبير جدًا.تمييع المحللة 10 مرات ثم قم بتضخيمها، أو تقليل حجم العينة وإعادة التحلل؛

3) عينات الأنسجة ليست طازجة.يوصى باستخدام عينات الأنسجة الطازجة؛

4) سوء نوعية التمهيدي.استخدم الحمض النووي الجينومي للتضخيم للتحقق من جودة التمهيدي وتحسين تصميم التمهيدي.

2.تضخيم غير محدد

1) درجة حرارة التلدين منخفضة جدًا ورقم الدورة مرتفع جدًا.زيادة درجة حرارة التلدين وتقليل عدد الدورات؛

2) تركيز القالب مرتفع جدًا.تقليل كمية القالب أو تخفيف القالب 10 مرات بعد التضخيم؛

3) ضعف خصوصية التمهيدي.تحسين التصميم التمهيدي.

ملحوظات

1.من أجل تجنب التلوث المتبادل بين العينات، ينبغي إعداد أدوات أخذ عينات متعددة، ويمكن تنظيف سطح الأدوات بمحلول هيبوكلوريت الصوديوم 2٪ أو منظف الحمض النووي بعد كل عينة إذا كان الاستخدام المتكرر مطلوبًا.

2.من المستحسن استخدام أنسجة الماوس الطازجة، ويجب ألا يكون حجم العينات كبيرًا جدًا لتجنب التأثير على نتائج التضخيم.

3.يجب أن يتجنب Lysis Buffer التجميد المتكرر والذوبان، ويمكن تخزينه في درجة حرارة 2 إلى 8 درجات مئوية للاستخدام المتعدد على المدى القصير.إذا تم تخزينه في درجة حرارة منخفضة، فقد يحدث تساقط، ويجب إذابته بالكامل قبل الاستخدام.

4.يجب أن يتجنب PCR Mix التجميد والذوبان المتكرر، ويمكن تخزينه عند درجة حرارة 4 درجات مئوية للاستخدام المتكرر على المدى القصير.

5.هذا المنتج مخصص فقط للبحث العلمي التجريبي ولا ينبغي استخدامه في التشخيص أو العلاج السريري.