مجموعة أدوات استخراج DNA/RNA الفيروسي
هذه المجموعة مناسبة للاستخراج السريع للحمض النووي/الحمض النووي الريبي الفيروسي عالي النقاء من عينات مثل مسحات البلعوم الأنفي، والمسحات البيئية، والمواد الطافية لثقافة الخلايا، والمواد الطافية المتجانسة للأنسجة.تعتمد المجموعة على تقنية تنقية غشاء السيليكا التي تلغي الحاجة إلى استخدام المذيبات العضوية الفينول/الكلوروفورم أو ترسيب الكحول الذي يستغرق وقتًا طويلاً لاستخراج الحمض النووي/الحمض النووي الريبوزي الفيروسي عالي الجودة.الأحماض النووية التي تم الحصول عليها خالية من الشوائب وجاهزة للاستخدام في تجارب المصب مثل النسخ العكسي، PCR، RT-PCR، PCR في الوقت الحقيقي، تسلسل الجيل التالي (NGS)، وصمة عار الشمالية.
شروط التخزين
يخزن في درجة حرارة 15 ~ 25 درجة مئوية، وينقل في درجة حرارة الغرفة
عناصر
| عناصر | 100RXNS |
| المخزن المؤقت VL | 50 مل |
| المخزن المؤقت RW | 120 مل |
| خالية من RNase ddH2 O | 6 مل |
| أعمدة FastPure RNA | 100 |
| أنابيب التجميع (2 مل) | 100 |
| أنابيب جمع خالية من RNase (1.5 مل) | 100 |
المخزن المؤقت VL:توفير بيئة للتحلل والربط.
المخزن المؤقت رو:إزالة البروتينات المتبقية والشوائب الأخرى.
RNase خالية ddH2O:أزل الحمض النووي/الحمض النووي الريبي (RNA) من الغشاء الموجود في عمود الدوران.
أعمدة FastPure RNA:يكثف الحمض النووي/الحمض النووي الريبي (RNA) على وجه التحديد.
أنابيب التجميع 2 مل:جمع الترشيح.
أنابيب جمع خالية من RNase 1.5 مل:جمع الحمض النووي/الحمض النووي الريبي.
التطبيقات
مسحات البلعوم الأنفي، والمسحات البيئية، والمواد الطافية لثقافة الخلايا، والمواد الطافية المتجانسة للأنسجة.
ماتر المعدة ذاتياط المرض
نصائح ماصة خالية من RNase، 1.5 مل أنابيب الطرد المركزي خالية من RNase، أجهزة الطرد المركزي، خلاط دوامة، والماصات.
عملية التجربة
تنفيذ كافة الخطوات التالية في خزانة السلامة الأحيائية.
1. أضف 200 ميكرولتر من العينة إلى أنبوب طرد مركزي خالٍ من RNase (قم بالتعويض باستخدام PBS أو 0.9% NaCl في حالة عدم كفاية العينة)، أضف 500 ميكرولتر من Buffer VL، واخلط جيدًا عن طريق التدوير لمدة 15 - 30 ثانية، وأجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع الخليط في الجزء السفلي من الأنبوب.
2. ضع أعمدة FastPure RNA في أنابيب تجميع 2 مل.انقل الخليط من الخطوة 1 إلى أعمدة FastPure RNA، وأجهزة الطرد المركزي عند 12000 دورة في الدقيقة (13400 × جم) لمدة دقيقة واحدة، وتخلص من المرشح.
3. أضف 600 ميكرولتر من المخزن المؤقت RW إلى أعمدة FastPure RNA، وأجهزة الطرد المركزي عند 12000 دورة في الدقيقة (13400 × جم) لمدة 30 ثانية، وتخلص من المرشح.
4. كرر الخطوة 3.
5. الطرد المركزي العمود الفارغ عند 12000 دورة في الدقيقة (13400 × جم) لمدة دقيقتين.
6. قم بنقل أعمدة FastPure RNA بعناية إلى مجموعة أنابيب جديدة خالية من RNase سعة 1.5 مل (متوفرة في المجموعة)، وأضف 30 – 50 ميكرولتر من ddH2O الخالي من RNase إلى مركز الغشاء دون لمس العمود.السماح للوقوف في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 دقيقة وأجهزة الطرد المركزي عند 12000 دورة في الدقيقة (13400 × ز) لمدة 1 دقيقة.
7. تجاهل أعمدة FastPure RNA.يمكن استخدام DNA/RNA مباشرة لإجراء فحوصات لاحقة، أو تخزينه في درجة حرارة -30 ~ -15 درجة مئوية لفترة قصيرة أو -85 ~ -65 درجة مئوية لفترة أطول.
ملحوظات
للاستخدام البحثي فقط.ليس للاستخدام في إجراءات التشخيص.
1. موازنة العينات لدرجة حرارة الغرفة مقدما.
2. الفيروسات شديدة العدوى.يرجى التأكد من اتخاذ كافة احتياطات السلامة اللازمة قبل التجربة.
3. تجنب تكرار تجميد العينة وإذابتها، لأن ذلك قد يؤدي إلى تدهور أو انخفاض إنتاج الحمض النووي/الحمض النووي الريبي (RNA) الفيروسي المستخرج.
4. تشتمل المعدات المعدة ذاتيًا على أطراف ماصة خالية من RNase، وأنابيب طرد مركزي خالية من RNase سعة 1.5 مل، وأجهزة طرد مركزي، وخلاط دوامي، وماصات.
5. عند استخدام المجموعة، قم بارتداء معطف المختبر، وقفازات اللاتكس القابل للتصرف، وقناع يمكن التخلص منه واستخدام المواد الاستهلاكية الخالية من RNase لتقليل مخاطر تلوث RNase.
6. قم بتنفيذ جميع الخطوات في درجة حرارة الغرفة ما لم ينص على خلاف ذلك.
الآلية وسير العمل
