الفوسفاتيز القلوي (ALP)
وصف
يُشتق الفوسفاتيز القلوي من سلالة الإشريكية القولونية المؤتلفة التي تحمل جين TAB5.يحفز الإنزيم نزع الفسفرة من نهايات 5' و 3' من فوسفومونسترات الحمض النووي الريبي (DNA) والحمض النووي الريبي (RNA).كما أنه يتحلل الريبوز، وكذلك ثلاثي فوسفات ديوكسي ريبونوكليوسيد (NTPs وdNTPs).يعمل TAB5 الفوسفاتيز القلوي على أطراف 5' بارزة و5' غائرة وغير حادة.يمكن استخدام الفوسفاتيز في العديد من تطبيقات البيولوجيا الجزيئية، مثل الاستنساخ أو وضع العلامات على نهاية المسبار لإزالة الأطراف الفسفورية للحمض النووي أو الحمض النووي الريبي (RNA).في تجارب الاستنساخ، يمنع نزع الفسفرة الحمض النووي البلازميد الخطي من الارتباط الذاتي.يمكنه أيضًا تحليل dNTPs غير المدمجة في تفاعلات PCR لإعداد قالب لتسلسل الحمض النووي.يتم تعطيل الإنزيم تمامًا وبشكل لا رجعة فيه عن طريق التسخين عند 70 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، مما يجعل إزالة الفوسفاتيز قبل الربط أو وضع العلامات النهائية غير ضرورية
الاستخدام
1. يمكن للفوسفاتيز القلوي المقترن بالبروتينات (الأجسام المضادة، والستربتافيدين، وما إلى ذلك) تحديد الجزيئات المستهدفة على وجه التحديد، ويمكن استخدامه في ELISA وWB والكشف الكيميائي النسيجي؛
2. يمكن استخدام الفوسفاتيز القلوي لإزالة الفسفور من الطرف 5 من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي (RNA) لمنع الارتباط الذاتي.
3. يمكن تسمية الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي (RNA) منزوع الفسفرة أعلاه بواسطة الفوسفات المسمى راديويًا (عبر كيناز بولي نيوكليوتيد T4)
التركيب الكيميائي
تخصيص
عناصر الاختبار | تحديد |
نشاط الانزيم | 5U/ميكروليتر |
نشاط نوكلياز | لم يتم الكشف عن |
نشاط نوكلياز | لم يتم الكشف عن |
نشاط النيك | لم يتم الكشف عن |
نشاط ريبونوكلياز | لم يتم الكشف عن |
الحمض النووي للإشريكية القولونية | ≥1 نسخة/5U |
السموم الداخلية | اختبار LAL، ≥10EU/مجم |
نقاء | ≥95% |
النقل والتخزين
مواصلات:محيط ب
تخزين :يخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية
يوصى بإعادة الاختبارحياة:2 سنة