RT-LAMP اللونية ماستر ميكس HCB5204A
يحتوي هذا المنتج على محلول عازل للتفاعل، ومزيج إنزيمات RT (بوليميراز الحمض النووي Bst والنسخ العكسي المقاوم للحرارة)، ومواد حماية مجففة بالتجميد، ومكونات صبغية مولدة للون.للاستخدام، فقط استخدم Buffer، حيث يتم خلط إنزيم التفاعل والبرايمر وإضافتهما إلى القالب؛يمكن إضافة مادة حافظة مجففة بالتجميد بشكل مستقيم.تم توصيله بمجفف بالتجميد ومجفف بالتجميد، وتمت إضافة البادئات والقوالب فقط عند استخدامها.توفر هذه المجموعة كشفًا بصريًا سريعًا وواضحًا للتضخيم، حيث تتم الإشارة إلى التفاعل السلبي باللون الأحمر والتفاعل الإيجابي من خلال التغيير إلى اللون الأصفر.
عنصر
| عنصر | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| عازلة التضخيم بوساطة حلقة (مع صبغ) | 0.96 مل | 4.80 مل×2 | 9.60 مل×10 |
| مزيج إنزيمات RT | 270 ميكرولتر | 2.70 مل | 2.70 مل×10 |
| واقي مجفف بالتجميد | 0.96 مل×2 | 9.60 مل×2 | 9.60 مل×20 |
التطبيقات
لتضخيم الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي (RNA) متساوي الحرارة.
شروط التخزين
يُنقل بالثلج الجاف، ويُخزن في درجة حرارة -25~ -15 درجة مئوية.تجنب التجميد والذوبان بشكل متكرر، المنتج صالح لمدة 12 شهرًا.
بروتوكول
1.ذوبان الجليد في المخزن المؤقت للتفاعل لاستخدامه في درجة حرارة الغرفة.دوامة لفترة وجيزة أو عكس الأنابيب عدة مرات لخلط جيدا، ثم أجهزة الطرد المركزي لجمع السائل إلى الجزء السفلي من الأنبوب.
2.تحضير نظام التفاعليمكن تحضير هذا الكاشف في نظامين للتفاعل، مزيج التفاعل السائل ومزيج النظام المجفف بالتجميد.
1) تحضير مزيج التفاعل السائل
| عنصر | مقدار |
| عازلة التضخيم بوساطة حلقة (مع صبغ) | 10 ميكرولتر |
| مزيج إنزيمات RT | 2.8 ميكرولتر |
| 10 × خليط برايمرa | 5 ميكرولتر |
| قوالب DNA/RNA b | × ميكرولتر |
| مياه خالية من نوكلياز | ما يصل إلى 50 ميكرولتر |
2) مزيج نظام التجفيد
① تحضير المزيج المجفف بالتجميد
| عنصر | مقدار |
| عازلة التضخيم بوساطة حلقة (مع صبغ) | 10 ميكرولتر |
| واقي مجفف بالتجميد | 20 ميكرولتر |
| مزيج إنزيمات RT | 2.8 ميكرولتر |
| مياه خالية من نوكلياز | ما يصل إلى 50 ميكرولتر |
② التجفيد: تم تجفيف المزيج المحضر في نظام 50 ميكرولتر
③ تحضير مزيج التفاعل
| عنصر | مقدار |
| مزيج مجفف بالتجميد | 1 قطعة |
| 10 × خليط برايمرa | 5 ميكرولتر |
| قوالب DNA/RNA b | × ميكرولتر |
| مياه خالية من نوكلياز | ما يصل إلى 50 ميكرولتر |
ملحوظات:
1) أ.10 × مزيج تمهيدي: 16 ميكرومتر FIP/BIP، 2 ميكرومتر F3/B3، 4 ميكرومتر حلقة F/B؛
2) ب.يوصى باستخدام DEPC (قابل للذوبان في الماء) في قالب الحمض النووي.
1.احتضان عند 65 درجة مئوية لمدة 30-45 دقيقة، والتي يمكن تمديدها بشكل مناسب وفقا لتغير اللون وقت التفاعل.
2.بالعين المجردة، كان اللون الأصفر إيجابيا والأحمر سلبيا.
ملحوظات
1.قد يظهر الملح في الجزء السفلي من الأنبوب العازل، دوامة لفترة وجيزة أو عكس الأنابيب عدة مرات لخلط جيدا في درجة حرارة الغرفة.
2.يمكن تحسين درجة حرارة التفاعل بين 62 درجة مئوية و68 درجة مئوية وفقًا لحالة البادئات.
3.لا ينبغي أن تتعرض الكواشف المعبأة للهواء لفترة طويلة.
4.يعتمد تفاعل تغير اللون الأحمر والأصفر على تغير الرقم الهيدروجيني لنظام التفاعل، يرجى عدم استخدام محلول تخزين الحمض النووي Tris، يوصى باستخدام ddH2يا حمض نووي مخزن؛
5.ينبغي توحيد التجربة، بما في ذلك إعداد نظام التفاعل، والتجفيد، ومعالجة العينات وعملية إضافة العينات؛
6.لتجنب التلوث، فمن المستحسن إعداد نظام التفاعل في مقعد نظيف للغاية، في قوالب أخرى أضف إلى غطاء الدخان للغرفة لتجنب التدخل الإيجابي الكاذب.
