درجة الحرارة الحساسة للأمم المتحدة
يتم الحصول على UNG الحساسة لدرجة الحرارة (TS-UNG) عن طريق التعبير المؤتلف في E. coli.يحفز الإنزيم إطلاق اليوراسيل الحر من الحمض النووي المفرد والمزدوج الذي يحتوي على اليوراسيل، وهو غير نشط ضد الحمض النووي الريبي (RNA).بالمقارنة مع إنزيم UNG التقليدي من أصل جينة E. coli، فإن إنزيم TS-UNG له نشاط أعلى في درجات الحرارة المنخفضة (20 درجة مئوية ~ 37 درجة مئوية) وهو حساس لدرجة الحرارة ويمكن تعطيله بسهولة (50 درجة مئوية)، مما يتجنب تدهور التضخيم المحتوي على dUTP المنتجات في درجة حرارة الغرفة من خلال النشاط المتبقي الذي قد يبقى بعد تعطيل إنزيم UNG التقليدي.ولذلك، فإن إنزيم TS-UNG ليس مناسبًا فقط لتفاعل منع التلوث PCR، ولكنه يتوافق أيضًا بشكل جيد مع برنامج تضخيم RT-PCR ويمكن استخدامه في تفاعل منع التلوث RT-PCR.
التطبيق الموصى به
تضخيم منع التلوث
حالة التخزين
-20 درجة مئوية للتخزين طويل الأمد، يجب خلطه جيدًا قبل الاستخدام، وتجنب التجميد والذوبان المتكرر.
المخزن المؤقت للتخزين
20 ملم تريس-حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 7.5)، 100 ملم كلوريد الصوديوم، 0.1 ملم EDTA، 1 ملم DTT، مثبت، 50٪ جلسرين.
تعريف الوحدة
كمية الإنزيم المطلوبة لتحليل 1 ميكروجرام من الحمض النووي المفرد الذي يحتوي على قواعد ثنائي اليورانيوم في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية هي وحدة نشاط واحدة (U).
رقابة جودة
1.SDS-PAGE نقاء الكهربي أكبر من 98%
2.نشاط التدهور، والتحكم من دفعة إلى دفعة، والاستقرار
3.لا يوجد نشاط نوكلياز خارجي، ولا يوجد نوكلياز خارجي أو تلوث نوكلياز خارجي.
تعليمات
| عناصر | الحجم (ميكروليتر) | التركيز النهائي |
| 10 × PCR Buffer (خالي من dNTP، Mg²+حر) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP، dGTP، dATP) | - | 200 ميكرومتر |
| dUTP (استبدال dTTP) | - | 200-600 ميكرومتر |
| 25 ملي مجكل2 | 2-8 ميكرولتر | 1-4 ملم |
| 5 وحدة/ميكروليتر طاق | 0.25 | 1.25 ش |
| 1 وحدة/ميكرولتر-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 يو (0.1-0.5 يو) |
| 25 × خليط برايمرأ | 2 | 1× |
| نموذج | - | <1 ميكروجرام/رد فعل |
| ddH₂O | إلى 50 | - |
ملاحظة: أ: إذا تم استخدامه لـ qPCR/qRT-PCR، فيجب إضافة مسبار الفلورسنت إلى نظام التفاعل.عادة، تركيز التمهيدي النهائي من 0.2 ميكرومتر يمكن أن يعطي نتائج جيدة؛عندما يكون أداء التفاعل ضعيفًا، يمكن تعديل تركيز التمهيدي في نطاق 0.2-1 ميكرومتر.عادة، يتم تحسين تركيز المسبار في حدود 0.1-0.3 ميكرومتر.يمكن إجراء تجارب تدرج التركيز للعثور على أفضل مزيج من التمهيدي والمسبار.
ملحوظات
1.درجة حرارة التفاعل المثالية لإنزيم TS-UNG منخفضة نسبيًا، ويمكن تحسينها في نطاق 20 درجة مئوية ~ 37 درجة مئوية، ويمكن تحسين جرعة الإنزيم ووقت التفاعل في نطاق 0.1 ~ 0.5 وحدة، 5 ~ 10 دقائق؛ويمكن تعطيل الإنزيم في عملية النسخ العكسي.
2.إنها مناسبة لـ PCR وRT-PCR لمنع التلوث.
3.تجنب التجميد المتكرر والذوبان، ولا تعرض لتقلبات كبيرة في درجات الحرارة.
4.تتمتع الجينات المختلفة المراد تضخيمها بكفاءة استخدام مختلفة لـ dUTP وحساسية لإنزيم UNG، لذلك، إذا أدى استخدام نظام UNG إلى انخفاض حساسية الكشف، فيجب تعديل نظام التفاعل وتحسينه، وإذا كنت بحاجة إلى دعم فني، فيرجى الاتصال شركتنا.
