الدناز أنا (Rnase الحرة) (5u/ul)
رقم القط: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) هو إندووكسيريبونوكلياز داخلي يمكنه هضم الحمض النووي المفرد أو المزدوج.يتعرف ويشق روابط فوسفوديستر لإنتاج نيوكليوتيدات أحادية أو أوليغوديوكسينوكليوتيدات مفردة أو مزدوجة الجديلة مع مجموعات الفوسفات عند الطرف 5' والهيدروكسيل عند الطرف 3'.نشاط DNase I يعتمد على Ca2+ويمكن تفعيلها بواسطة أيونات المعادن ثنائية التكافؤ مثل المنغنيز2+والزنك2+.5 ملم كاليفورنيا2+يحمي الإنزيم من التحلل المائي.بحضور م2+يمكن للإنزيم أن يتعرف بشكل عشوائي على أي موقع على أي شريط من الحمض النووي ويقطعه.بحضور من2+، يمكن التعرف على الخيوط المزدوجة من الحمض النووي في وقت واحد وتقسيمها في نفس الموقع تقريبًا لتشكيل شظايا الحمض النووي ذات النهاية المسطحة أو شظايا الحمض النووي ذات النهاية اللزجة مع 1-2 نيوكليوتيدات بارزة.
عناصر
| اسم | 0.1كو | 1كو | 5 كو | 50 كو |
| DNase I، خالي من RNase | 20 ميكرولتر | 200 ميكرولتر | 1 مل | 10 مل |
| 10×DNase أنا العازلة | 1 مل | 1 مل | 5 × 1 مل | 5 × 10 مل |
شروط التخزين
-25 درجة مئوية ~ -15 درجة مئوية للتخزين؛النقل تحت عبوات الثلج.
تعليمات
1. قم بإعداد محلول التفاعل في الأنبوب الخالي من RNase وفقًا للنسب المذكورة أدناه:
| عنصر | مقدار |
| الحمض النووي الريبي | X ميكروغرام |
| 10 × الدناز أنا العازلة | 1 ميكرولتر |
| DNase I، خالي من RNase (5U/μL) | 1 وحدة لكل ميكروغرام من الحمض النووي الريبي (RNA)① |
| ddH2O | ما يصل إلى 10 ميكرولتر |
ملاحظة: ①احسب حجم DNase I الذي يجب إضافته بناءً على كمية الحمض النووي الريبي (RNA).
2. 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة؛
3. أضف 0.5M EDTA إلى التركيز النهائي 2.5mM~5mM، وقم بتسخينه عند 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق لإيقاف التفاعل.يمكن استخدام العينة مباشرة للتفاعل التالي مثل النسخ العكسيتجربة.
تعريف الوحدة
يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية الإنزيم التي ستتحلل تمامًا 1 ميكروجرام من pBR322الحمض النووي في 10 دقائق عند 37 درجة مئوية.
رقابة جودة
رناسي:5U من DNase I مع 1.6 ميكروغرام MS2 RNA لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية لا ينتج عنه أي تدهوريتم تحديده عن طريق الفصل الكهربائي لهلام الاغاروز.
ملحوظات
1. يرجى تحضير 0.5MEDTA بنفسك.
2. استخدم 1U الدناز أنا لكل ميكروغرام من الحمض النووي الريبي.ومع ذلك، إذا كان الحمض النووي الريبي أقل من 1 ميكروغرام، يرجى استخدام 1U DNase I.
3. يرجى وضع الإنزيم على الجليد أثناء التشغيل.
