Superstart qPCR Premix plus-UNG
رقم القط: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG هو كاشف متخصص مصمم لتفاعلات PCR النوعية والكمية في الوقت الفعلي باستخدام الكشف القائم على المسبار، والذي تم تطويره خصيصًا لعمليات التجفيد.يحتوي على إنزيم البدء الساخن الجديد Hotstart Taq plus (DG)، والذي يتميز بنشاط إنزيم Taq الخاص به مختومًا في درجة حرارة الغرفة، مما يمنع بشكل فعال التضخيم غير المحدد الناتج عن التلدين غير المحدد أو تكوين خافت التمهيدي في ظروف درجات الحرارة المنخفضة، وبالتالي تحسين خصوصية رد فعل التضخيم.يستخدم هذا الكاشف مخزنًا مؤقتًا محددًا لـ qPCR ونظام مكافحة التلوث UNG/dUTP لتحقيق البدء السريع السريع، مما يحسن بشكل كبير من كفاءة وحساسية تفاعلات qPCR.يمكنه الحصول على منحنيات قياسية جيدة في مجموعة واسعة من مجالات القياس الكمي وإجراء القياس الكمي بدقة، مما يمنع بشكل فعال التضخيم الإيجابي الكاذب الناجم عن منتجات PCR المتبقية أو تلوث الهباء الجوي.يتوافق هذا الكاشف مع معظم أدوات PCR الكمية الفلورية من الشركات المصنعة مثل Applied Biosystems، وEppendorf، وBio-Rad، وRoche وما إلى ذلك، ويظهر ثباتًا جيدًا في الشكل المجفف بالتجميد.
تكوين الكاشف
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+مجاني) (د.ج)
2. 250 ملم MgCl2
3. 4 × lyoprotectant (اختياري)
شروط التخزين
تخزين طويل الأمد عند -20 درجة مئوية؛يمكن تخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر.تخلط جيدا قبل الاستخدام وتجنب تكرار التجميد والذوبان.
بروتوكول ركوب الدراجات
| إجراء | درجة حرارة. | وقت | دورة |
| الهضم | 50 درجة مئوية | 2 دقيقة | 1 |
| تنشيط البوليميراز | 95 درجة مئوية | 1 ~ 5 دقائق | 1 |
| طبيعة | 95 درجة مئوية | 10 ~ 20 ثانية | 40-50 |
| الصلب والتمديد | 56 ~ 64 درجة مئوية | 20 ~ 60 ثانية | 40-50 |
qPCR نظام التفاعل السائلتحضير الجذع
|
تعبير |
حجم 25 ميكرولتر |
حجم 50 ميكرولتر |
التركيز النهائي |
| 5 × هوت ستارت بريميكس بلس-UNG(ملغ2+مجاني) (د.ج) | 5 ميكرولتر | 10 ميكرولتر | 1× |
| 250 ملي مولار ملغ2 | 0.45 ميكرولتر | 0.9 ميكرولتر | 4.5 ملم |
| 4×ليوبروتكتانت1 | 6.25 ميكرولتر | 12.5 ميكرولتر | 1× |
| 25 × مزيج مسبار التمهيدي2 | 1 ميكرولتر | 2 ميكرولتر | 1× |
| قالب الحمض النووي3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | إلى 25 ميكرولتر | إلى 50 ميكرولتر | —— |
1. عادة ما يؤدي التركيز النهائي بمقدار 0.2 ميكرومتر للبادئات إلى نتائج جيدة؛عندما يكون أداء التفاعل ضعيفًا، قم بضبط تركيز التمهيدي ضمن نطاق 0.2-1μM حسب الحاجة.عادةً ما يتم تحسين تركيز المسبار ضمن نطاق 0.1-0.3μM من خلال تجارب التدرج للعثور على التركيبات المثالية.
2. يختلف عدد نسخ الجينات المستهدفة الموجودة في أنواع مختلفة من القوالب؛إذا لزم الأمر، يمكن إجراء تخفيف التدرج لتحديد مقدار إضافة القالب الأمثل.
3. يمكن تجفيف هذا النظام بالتجميد.عندما يستخدم العملاء هذا النظام دون متطلبات التجميد والتجفيف، يمكن إضافة 4 × lyoprotectant بشكل انتقائي؛ إذا كانت هناك حاجة إلى منتجات مجففة بالتجميد، أثناء التحقق من صحة أداء المنتج في مرحلة الكواشف السائلة، يجب إضافة 4 × lyoprotectant لضمان الاتساق مع مكونات النظام المجفف بالتجميد والآثار.
عندما يتم استخدام النظامد للتجفيف بالتجميد، قم بإعداد نظام as التالي:
| تعبير | 25ميكرولتر نظام رد الفعل |
| 5 × هوتستارت بريميكس بلس-UNG (Mg2+مجاني) (د.ج) | 5 ميكرولتر |
| 250 ملي مولار ملغ2 | 0.45 ميكرولتر |
| 4×ليوبروتكتانت | 6.25 ميكرولتر |
| 25 × مزيج مسبار التمهيدي | 1 ميكرولتر |
| ddH2O | إلى 18 ~ 20 ميكرولتر |
* إذا كانت هناك حاجة إلى أنظمة أخرى للتجفيف بالتجميد، فيرجى استشارة بشكل منفصل.
عملية التجفيدss
| إجراء | درجة حرارة. | وقت | حالة | ضغط |
| ما قبل التجميد | 4 درجة مئوية | 30 دقيقة | يمسك |
1 أجهزة الصراف الآلي |
| -50 درجة مئوية | 60 دقيقة | تبريد | ||
| -50 درجة مئوية | 180 دقيقة | يمسك | ||
| التجفيف الأولي | -30 درجة مئوية | 60 دقيقة | التدفئة |
فراغ في نهاية المطاف |
| -30 درجة مئوية | 70 دقيقة | يمسك | ||
| التجفيف الثانوي | 25 درجة مئوية | 60 دقيقة | التدفئة |
فراغ في نهاية المطاف |
| 25 درجة مئوية | 300 دقيقة | يمسك |
2. عملية التجفيد المذكورة أعلاه هي للإشارة فقط.تتميز أنواع المنتجات المختلفة ومجففات التجميد المختلفة بمعايير مختلفة، لذلك يمكن إجراء التعديلات وفقًا للفعل الفعليالظروف أثناء الاستخدام.
3. قد تكون عمليات التجفيد المختلفة مناسبة لأحجام دفعات مختلفة من المجفف بالتجميدالمنتجات، لذلك يجب إجراء اختبار التحقق الكافي عند استخدامها للإنتاج على نطاق واسع.
تعليمات لاستخدام lyophilizeد مسحوق
1. الطرد المركزي لفترة وجيزة مسحوق مجفف بالتجميد.
2. أضف قالب الحمض النووي إلى المسحوق المجفف بالتجميد وأضف الماء حتى 25 ميكرولتر؛
3. تخلط جيدا عن طريق الطرد المركزي وتشغيلها على الجهاز.
رقابة جودة:
1. الاختبارات الوظيفية: الحساسية والنوعية وإمكانية تكرار نتائج qPCR.
2. لا يوجد نشاط نوكلياز خارجي، ولا يوجد تلوث داخلي/نوكلياز خارجي.
معلومات تقنية:
1. يستخدم Superstart qPCR Premix plus-UNG إنزيم البدء الساخن الجديد الذي يتيح البدء السريع السريع خلال 1 إلى 5 دقائق؛من خلال تركيبة عازلة خاصة، فهي مناسبة لتفاعلات PCR الكمية الفلورية المتعددة.
2. لديها خصوصية أعلى مما يحسن بشكل كبير حساسية الكشف عن حد PCR الكمي مضان، مما يجعل منحنيات التضخيم التطبيع، وقيمة مضان الحصول على تحسن واضح في قوالب تركيز منخفض، ومناسبة ككواشف كشف PCR الكمية مضان حساسية عالية.
3. بالنسبة للبادئات ذات درجة حرارة التلدين المنخفضة أو الأجزاء الأطول من 200 نقطة أساس، يوصى باستخدام طريقة 3 خطوات.
4. تختلف كفاءة استخدام dUTP وحساسية إنزيم UNG باختلاف الجينات المستهدفة، وبالتالي إذا كان استخدام نظام UNG يؤدي إلى انخفاض في حساسية الكشف، فيجب تعديل نظام التفاعل وتحسينه.إذا كان الدعم الفني مطلوبًا، فيرجى الاتصال بشركتنا.
5. استخدم المناطق والماصات المخصصة قبل وبعد التضخيم، وارتداء القفازات أثناء التشغيل واستبدلها بشكل متكرر؛لا تفتح أنبوب التفاعل بعد اكتمال PCR لتقليل تلوث العينات بمنتجات PCR.
