متعدد qPCR التحقيق بريمكس
رقم القط: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (القائم على الصبغة) هو حل مسبق لتضخيم PCR الكمي 2 × في الوقت الحقيقي الذي يتميز بحساسية وخصوصية عالية، وهو أزرق اللون، وله تأثير إضافة العينة.هذا المنتج عبارة عن كاشف مختلط مسبقًا 2× Mix والذي يتيح ما يصل إلى أربعة تفاعلات PCR كمية فلورسنتية في بئر تفاعل واحد.يحتوي هذا المنتج على طريقة الأجسام المضادة المعدلة وراثيًا لبدء إنزيم Taq بشكل ساخن، مما يحسن بشكل كبير حساسية التضخيم ونوعيته.في الوقت نفسه، قام هذا المنتج بتحسين المخزن المؤقت متعدد التفاعلات بشكل عميق، والذي يمكنه تحسين كفاءة تضخيم التفاعل وتعزيز التضخيم الفعال للقوالب منخفضة التركيز.يمكن استخدام هذا المنتج في التنميط الجيني والتحليل الكمي المتعدد.
تخصيص
| بداية ساخنة | بداية ساخنة مدمجة |
| طريقة الكشف | الكشف عن التحقيق التمهيدي |
| طريقة PCR | qPCR |
| بوليميريز | طق بوليميريز الحمض النووي |
| نوع العينة | الحمض النووي |
شروط التخزين
يتم شحن المنتج مع الثلج الجاف ويمكن تخزينه في درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية لمدة عامين.
تعليمات
1. رد الفعلنظام
| عناصر | الحجم (ميكروليتر) | التركيز النهائي |
| 2 × TaqMan Multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| مزيج التمهيدي (10 ميكرومول / لتر) a | × | 0.1 - 0.5 ميكرومول/لتر |
| مزيج المسبار (10 ميكرومول/لتر)b | × | 50 - 250 نانومول/لتر |
| صبغة روكس المرجعية | 0.5 | 1× |
| قالب الحمض النووي/كدنا | 1-10 | - |
| ddH2O | ما يصل إلى 25 | - |
ملحوظات:امزج جيدًا قبل الاستخدام لتجنب الفقاعات الزائدة الناتجة عن الاهتزاز القوي.
أ.تركيز التمهيدي: يحتوي مزيج التمهيدي على أزواج متعددة من البادئات، عادة كل بادئ بتركيز نهائي قدره 0.2 ميكرومول/لتر ويمكن أيضًا ضبطه بين 0.1 و0.5 ميكرومول/لتر حسب الاقتضاء.
ب.تركيز المسبار: يحتوي مزيج المسبار على مجسات متعددة بإشارات فلورية مختلفة، ويمكن ضبط تركيز كل مسبار بين 50 و250 نانومول/لتر وفقًا للحالة المحددة.
1.مرجع صبغة Rox: يتم استخدامه في أداة تضخيم Real Time PCR مثل Applied Biosystems لتصحيح خطأ إشارة التألق المتولدة بين الآبار؛هذا المنتج لا يحتوي على مرجع صبغ Rox.يوصى باستخدام Cas#10200 إذا لزم الأمر.
2.تخفيف القالب: qPCR حساس للغاية، ومن المستحسن تخفيف القالب للاستخدام.إذا كان القالب حل مخزون [كدنا]، يجب ألا يتجاوز حجم القالب 1/10 من الحجم الإجمالي.
3.نظام التفاعل: يوصى بـ 25 ميكرولتر أو 30 ميكرولتر أو 50 ميكرولتر لضمان فعالية وتكرار تضخيم الجينات المستهدفة.
4.إعداد النظام: يرجى التحضير في المقعد النظيف للغاية، واستخدام الأطراف وأنابيب التفاعل دون بقايا نوكلياز؛يوصى باستخدام الأطراف مع خراطيش الفلتر.تجنب التلوث المتبادل وتلوث الهباء الجوي.
2.برنامج رد الفعل
| خطوة دورة | درجة حرارة. | وقت | دورات |
| تمسخ الأولي | 95 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
| تمسخ | 95 درجة مئوية | 15 ثانية | 45 |
| الصلب / التمديد | 60 درجة مئوية | 30 ثانية |
ملحوظات:
1.التلدين/التمديد: يمكن تعديل درجة الحرارة والوقت بشكل مناسب وفقًا لقيمة التمهيدي المصممة.
2.الحصول على إشارة الفلورسنت: يختلف وقت الحصول على إشارة الفلورسنت المطلوب لمختلف أدوات الكشف عن qPCR، يرجى ضبطه وفقًا للحد الأدنى للوقت.يتم تحديد وقت العديد من الأدوات المشتركة على النحو التالي:
20 ثانية: النظم البيولوجية التطبيقية 7700، 7900HT، 7500 سريع
31 ثانية: النظم البيولوجية التطبيقية 7300
32 ثانية: النظم الحيوية التطبيقية 7500
ملحوظات
يرجى ارتداء معدات الوقاية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك!
