متعدد خطوة واحدة RT-qPCR Premix-UNG
رقم القط: HCB5145A
تعد مجموعة مسبار RT-qPCR المتعددة (UDG Plus) عبارة عن مجموعة PCR كمية متعددة الإرسال تعتمد على RNA كقالب.أثناء التجربة، تم إجراء النسخ العكسي وPCR الكمي في نفس الأنبوب، مما أدى إلى تبسيط العملية التجريبية وتقليل خطر التلوث.في هذه المجموعة، تم تصنيع أول شريط cDNA بكفاءة بواسطة النسخ العكسي المقاوم للحرارة وتم تضخيمه كميًا بواسطة HotStart Tag DNA Polymerase.تحتوي المجموعة بشكل أساسي على المخزن المؤقت الأمثل لـ MP، ومزيج الإنزيمات، وما إلى ذلك. يحتوي المحلول المنظم بالفعل على المغنيسيوم2+و دنتب.بالإضافة إلى ذلك، تتم إضافة العوامل التي يمكن أن تمنع بشكل فعال تضخيم PCR غير المحدد وتحسين كفاءة التضخيم لتفاعلات qPCR المتعددة، والتي يمكن أن تضمن كفاءة التضخيم وتنفيذ ما يصل إلى تفاعل التضخيم المتعدد.تمت إضافة نظام dUTP/UDG لمنع خطر تلوث الهباء الجوي بشكل فعال.
عناصر
1. المخزن المؤقت
2. مزيج الانزيمات
تخصيص
| بداية ساخنة | بداية ساخنة مدمجة |
| طريقة الكشف | الكشف عن التحقيق التمهيدي |
| طريقة PCR | خطوة واحدة RT-qPCR |
| بوليميريز | طق بوليميريز الحمض النووي |
| نوع العينة | الحمض النووي |
شروط التخزين
يتم شحن المنتج مع الثلج الجاف ويمكن تخزينه في درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية لمدة سنة واحدة.وينبغي تجنب المتكررةتجميد ذوبان الجليد.يوصى بالحفظ بشكل منفصل.
تعليمات
1.رد فعل نظام
| عناصر | الحجم (ميكروليتر) | التركيز النهائي |
| 2 × ميجا بيكسل عازلة | 12.5 | 1× |
| مزيج الانزيم | 1 | - |
| مزيج التمهيدي/المسبار (2.5 ميكرومتر) | 3 | 0.3 ميكرومتر |
| قالب الحمض النووي الريبي | 1-10 | - |
| ريبونوكلياز H2O الحرة | إلى 25 | - |
ملحوظات:
تأكد من الخلط جيدًا قبل الاستخدام، وتجنب الفقاعات الزائدة الناتجة عن الاهتزاز العنيف.
أ.تركيز التمهيدي: مزيج التمهيدي بما في ذلك التمهيدي المتعدد، اعتمادًا على الحالة، قد يتراوح تركيز التمهيدي الأمثل بين 0.l و1.0μM.
ب.تركيز المسبار: مزيج المسبار بما في ذلك مجموعة الفلورسنت المختلفة التي تحدد مسبار الإرسال المتعدد، اعتمادًا على الحالة، قد يتراوح تركيز المسبار الأمثل بين 0.05 و0.5 ميكرومتر.
ج.تخفيف القالب: qPCR حساس للغاية ويوصى بتخفيف القالب.قيمة التحكم Ct مناسبة بين 20 و 35.
د.إعداد النظام: يرجى التحضير في طاولة العمل فائقة النظافة، وأنبوب الماصة وأنبوب التفاعل بدون بقايا نوكلياز؛فمن المستحسن استخدام رأس البندقية مع عنصر التصفية.تجنب التلوث المتبادل وتلوث الهباء الجوي.
2. ركوب الدراجات الأمثلبروتوكول
| دورة خطوة | درجة حرارة. | وقت | دورات |
| النسخ العكسي | 50 درجة مئويةأ | 20 دقيقة | 1 |
| تمسخ الأولي | 95 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
| رد فعل التضخيم | 95 درجة مئوية | 15 ثانية |
40-45 |
| 60 درجة مئوية b | 30 ثانية c |
ملحوظات:
أ.النسخ العكسي: يمكن أن تحدد درجة الحرارة 42 درجة مئوية أو 50 درجة مئوية.
ب.تفاعل التضخيم: يتم ضبط درجة الحرارة وفقًا لقيمة Tm للبادئات المصممة.
ج.الحصول على إشارة الفلورسنت: يرجى ضبط الإجراء التجريبي وفقًا لمتطلبات دليل الأدوات.
ملحوظات
يرجى ارتداء معدات الوقاية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك.
