Universal SYBR GREEN qPCR Premix (أزرق)

رقم القط: HCB5041B

يعد Universal Blue qPCR Master Mix (المعتمد على الصبغة) حلاً مسبقًا لتضخيم PCR الكمي 2 × في الوقت الحقيقي والذي يتميز بحساسية وخصوصية عالية، ولونه أزرق، وله تأثير تتبع إضافة العينة.يستخدم المكون الأساسي Taq DNA بوليميريز بداية ساخنة للجسم المضاد لمنع التضخيم غير المحدد بشكل فعال بسبب التلدين التمهيدي أثناء تحضير العينة.في الوقت نفسه، تضيف الصيغة عوامل تعزيز لتحسين كفاءة تضخيم تفاعل PCR ومعادلة تضخيم الجينات ذات محتويات GC المختلفة (30 ~ 70٪)، بحيث يمكن لـ PCR الكمي الحصول على علاقة خطية جيدة في نطاق كمي واسع. منطقة.يحتوي هذا المنتج على صبغة ROX السلبية المرجعية الخاصة، والتي تنطبق على معظم أدوات qPCR.ليس من الضروري ضبط تركيز ROX على أدوات مختلفة.من الضروري فقط إضافة الاشعال والقوالب لإعداد نظام التفاعل للتضخيم.

عناصر

العالمي الأزرق qPCR ماستر ميكس

شروط التخزين

يتم شحن المنتج مع عبوات ثلج ويمكن تخزينه في درجة حرارة -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية لمدة 18 شهرًا.ومن الضروري تجنب تشعيع الضوء القوي عند تخزين أو إعداد نظام التفاعل.

تخصيص

تعليمات

1. نظام التفاعل

[ملاحظة]: امزج جيدًا قبل الاستخدام لتجنب الفقاعات الزائدة الناتجة عن الاهتزاز القوي.

أ) تركيز التمهيدي: تركيز التمهيدي النهائي هو 0.2 ميكرومول/لتر، ويمكن أيضًا تعديله بين 0.1 و1.0 ميكرومول/لتر حسب الاقتضاء.

ب) تركيز القالب: إذا كان القالب هو محلول مخزون cDNA غير مخفف، فيجب ألا يتجاوز الحجم المستخدم 1/10 من الحجم الإجمالي لتفاعل qPCR.

ج) تخفيف القالب: من المستحسن تخفيف محلول مخزون cDNA بنسبة 5-10 مرات.يكون المقدار الأمثل للقالب المضاف أفضل عندما تكون قيمة Ct التي تم الحصول عليها عن طريق التضخيم 20-30 دورة.

د) نظام التفاعل: يوصى باستخدام 20 ميكرولتر أو 50 ميكرولتر لضمان فعالية وتكرار تضخيم الجينات المستهدفة.

ه) إعداد النظام: يرجى التحضير في المقعد النظيف للغاية واستخدام الأطراف وأنابيب التفاعل دون بقايا نوكلياز؛يوصى باستخدام الأطراف مع خراطيش الفلتر.تجنب التلوث المتبادل وتلوث الهباء الجوي.

2.برنامج رد الفعل

البرنامج القياسي

برنامج سريع

[ملاحظة]: البرنامج السريع مناسب للغالبية العظمى من الجينات، ويمكن تجربة البرامج القياسية لجينات البنية الثانوية المعقدة الفردية.

أ) درجة حرارة التلدين والوقت: يرجى الضبط وفقًا لطول الجين التمهيدي والجين المستهدف.

ب) الحصول على إشارة الفلورسنت (★): يرجى ضبط الإجراء التجريبي وفقًا للمتطلبات الواردة في تعليمات استخدام الأداة.

ج) منحنى الانصهار: يمكن استخدام البرنامج الافتراضي للأداة بشكل طبيعي.

3. تحليل النتائج 

كانت هناك حاجة إلى ما لا يقل عن ثلاث مكررات بيولوجية للتجارب الكمية.بعد التفاعل، يجب تأكيد منحنى التضخيم ومنحنى الانصهار.

3.1 منحنى التضخيم:

منحنى التضخيم القياسي على شكل حرف S.يكون التحليل الكمي أكثر دقة عندما تقع قيمة Ct بين 20 و30. إذا كانت قيمة Ct أقل من 10، فمن الضروري تخفيف القالب وإجراء الاختبار مرة أخرى.عندما تكون قيمة Ct بين 30-35، فمن الضروري زيادة تركيز القالب أو حجم نظام التفاعل، وذلك لتحسين كفاءة التضخيم وضمان دقة تحليل النتائج.عندما تكون قيمة Ct أكبر من 35، لا يمكن لنتائج الاختبار التحليل الكمي للتعبير عن الجين، ولكن يمكن استخدامها للتحليل النوعي.

3.2 منحنى الانصهار:

تشير الذروة الوحيدة لمنحنى الانصهار إلى أن خصوصية التفاعل جيدة ويمكن إجراء التحليل الكمي؛إذا أظهر منحنى الانصهار قمم مزدوجة أو متعددة، فلا يمكن إجراء التحليل الكمي.يُظهر منحنى الانصهار قممًا مزدوجة، ومن الضروري الحكم على ما إذا كانت الذروة غير المستهدفة عبارة عن خافتة أولية أو تضخيم غير محدد بواسطة التفريد الكهربي لهلام الاغاروز DNA.إذا كان التمهيدي ديمر، فمن المستحسن تقليل تركيز التمهيدي أو إعادة تصميم الاشعال بكفاءة تضخيم عالية.إذا كان التضخيم غير محدد، يرجى زيادة درجة حرارة الصلب، أو إعادة تصميم الاشعال بخصوصية.

ملحوظات

يرجى ارتداء معدات الوقاية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك!

هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط!