رنيز أ
Ribonuclease A (RNaseA) عبارة عن بولي ببتيد مفرد تقطعت به السبل يحتوي على 4 روابط ثاني كبريتيد بوزن جزيئي يبلغ حوالي 13.7 كيلو دالتون.RNase A عبارة عن نوكلياز داخلي يعمل على تحليل الحمض النووي الريبي (RNA) المفرد الذين تقطعت بهم السبل في بقايا C وU.على وجه التحديد، يتعرف الانقسام على رابطة فوسفوديستر التي تكونت من ريبوز 5′ من النيوكليوتيدات ومجموعة الفوسفات على 3′-ريبوز من نيوكليوتيد البيرميدين المجاور، بحيث يتم تحلل الفوسفات الحلقي 2، 3′ إلى 3 المقابلة. ′ فوسفات النيوكليوسيد (على سبيل المثال، يتم قطع pG-pG-pC-pA-pG بواسطة RNase A لتوليد pG-pG-pCp وA-PG).RNase A هو الأكثر نشاطًا في تقطيع الحمض النووي الريبي المفرد الذي تقطعت به السبل.تركيز العمل الموصى به هو 1-100 ميكروجرام/مل، وهو متوافق مع أنظمة التفاعل المختلفة.يمكن استخدام تركيز الملح المنخفض (0-100 ملي مولار كلوريد الصوديوم) لقطع سلاسل الحمض النووي الريبي (RNA) المفرد، والحمض النووي الريبي (RNA) المزدوج، وسلاسل الحمض النووي الريبي (RNA) التي تكونت عن طريق تهجين الحمض النووي الريبي (RNA-DNA).ومع ذلك، عند تركيز الملح العالي (≥0.3 م)، فإن RNase A يشق فقط الحمض النووي الريبي المفرد الذي تقطعت به السبل على وجه التحديد.
يتم استخدام RNase A بشكل شائع لإزالة الحمض النووي الريبي (RNA) أثناء تحضير DNA البلازميد أو DNA الجينومي. سواء كان DNase نشطًا أم لا أثناء عملية التحضير يمكن أن يؤثر بسهولة على التفاعل.يمكن استخدام الطريقة التقليدية للغليان في حمام مائي لتعطيل نشاط الدناز.لا يحتوي هذا المنتج على الدناز والبروتياز، ولا يحتاج إلى معالجة حرارية قبل الاستخدام.بالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضًا استخدام هذا المنتج في تجارب البيولوجيا الجزيئية مثل تحليل حماية RNase وتحليل تسلسل RNA.
شروط التخزين
يمكن تخزين المنتج في درجة حرارة -25～-15 درجة مئوية، صالح لمدة عامين.
تعليمات
هذه إحدى الطرق الشائعة لإعداد حل تخزين RNase A.كما يمكن تحضيره بواسطةطرق أخرى وفقا للطرق التقليدية في المختبر أو الأدبيات المرجعية (مثليذوب مباشرة في 10 مللي مولار Tris-HCl، درجة الحموضة 7.5 أو محلول Tris-NaCl)
1. استخدم 10 ملي خلات الصوديوم (الرقم الهيدروجيني 5.2) لإعداد 10 ملغ/مل من محلول تخزين RNase A
2. التسخين عند 100 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة
3. برد إلى درجة حرارة الغرفة، أضف 1/10 حجم 1 M Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 7.4)، اضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 (للحصول علىعلى سبيل المثال، أضف 500 مل من محلول تخزين RNase 10 جم/مل 1M Tris-HCL، PH7.4)
4. يتم تعبئتها جزئيًا عند -20 درجة مئوية للتخزين المجمد، والتي يمكن أن تكون مستقرة لمدة تصل إلى عامين.
[ملاحظات]: عند غليان محلول RNaseA في ظل ظروف محايدة، سوف يتشكل ترسيب RNase؛قم بغليه عند درجة حموضة أقل، وإذا كان هناك هطول يمكن ملاحظة ذلك، والذي قد يكون بسبب وجود شوائب البروتين.إذا تم العثور على رواسب بعد الغليان، فيمكن إزالة الشوائب عن طريق الطرد المركزي عالي السرعة (13000 دورة في الدقيقة)، ثم تعبئتها فرعيًا للتخزين بالتجميد.
معلومات المنتج
| المرادفات | ريبونوكلياز الأول؛ريبونوكلياز البنكرياس.ريبونوكلياز 3'-بيريميدنوليجونوكليوتيدوهيدرولاز.رناسي أ .إندوريبونولسيس I |
| CAS رقم. | 9001-99-4 |
| مظهر | مسحوق مجفف بالتجميد الأبيض |
| الوزن الجزيئي الغرامي | ~ 13.7 كيلو دالتون (تسلسل الأحماض الأمينية) |
| قيمه الحامضيه | 7.6 (نطاق النشاط 6-10) |
| درجة الحرارة المناسبة | 60 درجة مئوية (نطاق النشاط 15-70 درجة مئوية) |
| عامل التنشيط | Na2+.ك+ |
| المانع | مثبط رنا |
| طريقة التعطيل | لا يمكن تعطيله عن طريق التسخين، ويقترح استخدام عمود الطرد المركزي |
| أصل | بقري |
| الذوبان | قابل للذوبان في الماء (10 ملغ / مل) |
| خسارة على الجافة | .05.0% |
| نشاط الانزيم | ≥60 وحدة كونيتز/مجم |
| نقطة تساوي الكهربية | 9.6 |
ملحوظات
من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة أثناء التشغيل.
