2×HiF Taq بالإضافة إلى ماستر ميكس
رقم القط: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (مع الصبغة) هو محلول جاهز للاستخدام 2×مخلوط مسبقًا يحتوي على Plus HIF DNA Polymerase وdNTPs ومخزن مؤقت محسّن.يتم إضافة اثنين من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة في درجة حرارة الغرفة والتي تمنع نشاط البوليميراز ونشاط نوكلياز 3′→5′ إلى المزيج الرئيسي من أجل Hot Start PCR بسهولة وبشكل محدد للغاية.تتم إضافة عامل التمديد إلى المزيج الرئيسي لمنح الإنزيم قدرة تضخيم شظية طويلة، ويمكن أن يصل طول التضخيم إلى 13 كيلو بايت، والإنزيم لديه نشاط بوليميريز DNA 5′→3′ و3′→5′ نشاط نوكلياز خارجي، إخلاصه هو 83 مرة من بوليميريز الحمض النووي طق، وهو 9 أضعاف بوليميريز الحمض النووي العادي.إنها مناسبة لتضخيم القوالب المعقدة، منتج التضخيم هو نهاية حادة.
يتميز 2×HIF Taq plus Master Mix (مع الصبغة) بمزايا الحساسية السريعة والسهلة والعالية والنوعية القوية والثبات الجيد وما إلى ذلك، ويحتاج نظام التفاعل فقط إلى إضافة الاشعال والقوالب، ويمكن تضخيمه بواسطة اثنين- بروتوكول الخطوة، وتبسيط الخطوات التجريبية وتوفير الوقت.يحتوي هذا المنتج على أصباغ مؤشر للرحلان الكهربائي، ويمكن استخدام منتجات PCR مباشرة للرحلان الكهربائي.بالإضافة إلى ذلك، يحتوي المنتج أيضًا على عامل حماية محدد، بحيث يمكن للمزيج الرئيسي الحفاظ على نشاط مستقر بعد التجميد والذوبان المتكرر.
شروط التخزين
يجب تخزين المنتجات في -25 ~ -15 درجة مئوية لمدة سنة واحدة.
تحديد
مواصفات المنتج | سيد ميكس |
تركيز | 2× |
بداية ساخنة | المدمج في بداية ساخنة |
البروز | صريح |
سرعة رد الفعل | سريع |
الحجم (المنتج النهائي) | يصل إلى 13 كيلو بايت |
شروط النقل | ثلج جاف |
نوع المنتج | خلطات PCR عالية الدقة |
تعليمات
1.نظام تفاعل PCR
عناصر | الحجم (ميكروليتر) |
قالب الحمض النووي | مناسب |
التمهيدي إلى الأمام (10 ميكرومول / لتر) | 2.5 |
التمهيدي العكسي (10 ميكرومول/لتر) | 2.5 |
2×HIF Taq بالإضافة إلى ماستر ميكس | 25 |
ddH2O | إلى 50 |
2.يوصى باستخدام قوالب مختلفة
نوع القالب | تضخيم الأجزاء من 1 كيلو بايت إلى 10 كيلو بايت |
الحمض النووي الجيني | 50 نانوغرام - 200 نانوغرام |
البلازميد أو الحمض النووي الفيروسي | 10pg-20ng |
[كدنا]. | 1-2.5 ميكرولتر (لا تتجاوز 10% من حجم تفاعل PCR النهائي) |
3.بروتوكول التضخيم
1) بروتوكول من خطوتين (قالب التعقيد)
خطوة دورة | درجة حرارة. | وقت | دورات |
تمسخ الأولي | 98 درجة مئوية | 3 دقيقة | 1 |
تمسخ | 98 درجة مئوية | 10 ثانية | 30-35 |
امتداد | 68 درجة مئوية | 30 ثانية/كيلو بايت | |
التمديد النهائي | 72 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
2) بروتوكول ثلاثي الخطوات (البروتوكول العادي)
خطوة دورة | درجة حرارة. | وقت | دورات |
تمسخ الأولي | 98 درجة مئوية | 3 دقيقة | 1 |
تمسخ | 98 درجة مئوية | 10 ثانية | 30-35 |
التلدين | 60 درجة مئوية | 20 ثانية | |
امتداد | 72 درجة مئوية | 30 ثانية/كيلو بايت | |
التمديد النهائي | 72 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
3) الصلب بروتوكول التدرج (قالب التعقيد)
خطوة دورة | درجة حرارة | وقت | دورات |
تمسخ الأولي | 98 درجة مئوية | 3 دقيقة | 1 |
تمسخ | 98 درجة مئوية | 10 ثانية | 15 (تخفيض بمقدار 1 درجة لكل دورة) |
الصلب التدرج | 70-55 درجة مئوية | 20 ثانية | |
امتداد | 72 درجة مئوية | 30 ثانية/كيلو بايت | |
تمسخ | 98 درجة مئوية | 10 ثانية |
20 |
التلدين | 55 درجة مئوية | 20 ثانية | |
امتداد | 72 درجة مئوية | 30 ثانية/كيلو بايت | |
التمديد النهائي | 72 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
الميزات تحت بروتوكول التضخيم المختلفة
بروتوكولl | خطوتان | ثلاث خطوات | الصلب التدرج |
المواصفات. | سريع | واسطة | بطيء |
النوعية | عالي | واسطة | عالي |
العائد PCR | واسطة | عالي | واسطة |
معدل الكشف | عالي | واسطة | عالي |
ملحوظات
يرجى ارتداء معدات الوقاية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك!