هوتستارت طق بوليميريز الحمض النووي
Hot Start Taq DNA Polymerase (تعديل الجسم المضاد) هو بوليميريز DNA قابل للحرارة من Thermus aquaticus YT-1، والذي يمتلك نشاط بوليميريز 5′→3′ ونشاط نوكلياز داخلي 5´.إن بوليميريز الحمض النووي Taq ذو البداية الساخنة هو بوليميريز الحمض النووي Taq الذي تم تعديله بواسطة الأجسام المضادة Taq القابلة للحرارة.أدى تعديل الأجسام المضادة إلى زيادة خصوصية وحساسية وإنتاجية PCR.
عناصر
| عنصر | HC1012 أ-01 | HC1012 أ-02 | HC1012 أ-03 | HC1012 أ-04 |
| 5 × HC طق العازلة | 4×1 مل | 4×10 مل | 4×50 مل | 5×400 مل |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (جسم مضاد معدل) (5 وحدة/ميكروليتر) | 0.1 مل | 1 مل | 5 مل | 10×5 مل |
التطبيقات
10 ملم تريس-حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية)، 100 ملم بوكل، 0.1 ملم EDTA، 1 ملم ديثيوثريتول، 0.5٪ Tween20، 0.5٪ IGEPALCA-630 و 50٪ جلسرين.
حالة التخزين
النقل تحت 0 درجة مئوية ويتم تخزينه في -25 درجة مئوية ~ -15 درجة مئوية.
تعريف الوحدة
يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية الإنزيم الذي يدمج 15 نانومول من dNTP في مادة حمضية غير قابلة للذوبان في 30 دقيقة عند 75 درجة مئوية.
رقابة جودة
1.Endنشاط نوكلياز:أدى حضانة 20 وحدة من الإنزيم مع 4 ميكروغرام من الحمض النووي pUC19 لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية إلى عدم وجود تدهور يمكن اكتشافه في الحمض النووي كما هو محدد بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
2.5 كيلو بايت لامدا PCR:25 دورة من تضخيم PCR لـ 5 نانوغرام Lambda DNA مع 1.25 وحدة من Taq DNA Polymerase في وجود 200 ميكرومتر dNTPs و0.2 ميكرومتر بادئات تؤدي إلى المنتج المتوقع بحجم 5 كيلو بايت.
3.نشاط نوكلياز:حضانة تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على ما لا يقل عن 12.5 وحدة من بوليميريز الحمض النووي Taq مع 10 نانومول 5´-FAM قليل النوكليوتيد لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية لا ينتج عنه أي تدهور يمكن اكتشافه.
4.نشاط ريبونوكلياز:أدى حضانة تفاعل 10 ميكرولتر يحتوي على 20 وحدة إنزيم مع 1 ميكروجرام من نسخ الحمض النووي الريبي (RNA) لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية إلى عدم وجود تدهور ملحوظ في الحمض النووي الريبي (RNA) كما هو محدد بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
5.تعطيل الحرارة:لا.
نظام رد الفعل
| عناصر | مقدار |
| قالب الحمض النوويa | خياري |
| 10 ميكرومتر التمهيدي إلى الأمام | 0.5 ميكرولتر |
| 10 ميكرومتر عكس التمهيدي | 0.5 ميكرولتر |
| مزيج dNTP (10 مم لكل منهما) | 0.5 ميكرولتر |
| 5 × HC طق العازلة | 5 ميكرولتر |
| طق DNA بوليميريزب(5U/ميكروليتر) | 0.125 ميكرولتر |
| مياه خالية من نوكلياز | ما يصل إلى 25 ميكرولتر |
ملحوظات:
1) أ.
| الحمض النووي | كمية |
| الجينومية | 1 نانوجرام -1 ميكروجرام |
| البلازميد أو الفيروسي | 1 صفحة -1 نانوغرام |
2) ب.قد يتراوح التركيز الأمثل لـ Taq DNA Polymerase من 5-50 وحدة/مل (0.1-0.5 وحدة/تفاعل 25 ميكرولتر) في التطبيقات المتخصصة.
بروتوكول الدراجات الحرارية
تفاعل البوليميراز المتسلسل
| خطوة | درجة حرارة(درجة مئوية) | وقت | دورات |
| تمسخ الأوليa | 95 درجة مئوية | 1-3 دقائق | - |
| تمسخ | 95 درجة مئوية | 15-30 ثانية | 30-35 دورة |
| التلدينب | 45-68 درجة مئوية | 15-60 ثانية | |
| امتداد | 68 درجة مئوية | 1 كيلو بايت/دقيقة | |
| التمديد النهائي | 68 درجة مئوية | 5 دقائق | - |
ملحوظات:
1) إن التسخين الأولي لمدة دقيقة واحدة عند 95 درجة مئوية يكفي لمعظم التضخيم.بالنسبة للقوالب الصعبة، يوصى بتمسخ أطول لمدة 2-3 دقائق عند 95 درجة مئوية.مع مستعمرة PCR، يوصى بتسخين أولي لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية.
2) عادة ما تكون خطوة التلدين 15-60 ثانية.تعتمد درجة حرارة التلدين على Tm للزوج التمهيدي وعادة ما تكون 45-68 درجة مئوية.
