مثبط رنا
مثبط RNase الفئران هو مثبط RNase الفئران المؤتلف معبر عنه ومنقى من الإشريكية القولونية.وهو يرتبط بـ RNase A أو B أو C بنسبة 1:1 من خلال روابط غير تساهمية، وبالتالي يثبط نشاط الإنزيمات الثلاثة ويحمي الحمض النووي الريبي (RNA) من التحلل.ومع ذلك، فهو غير فعال ضد RNase 1 أو RNase T1 أو S1 Nuclease أو RNase H أو RNase من الرشاشيات.تم اختبار مثبط Murine RNase بواسطة RT-PCR وRT-qPCR وIVT mRNA، وكان متوافقًا مع العديد من النسخ العكسية التجارية وبوليميرات DNA وبوليميرات RNA.
بالمقارنة مع مثبطات RNase البشرية، لا يحتوي مثبط RNase الفأري على اثنين من السيستين الحساسة للغاية للأكسدة التي تسبب تعطيل نشاط المانع.مما يجعلها مستقرة عند تركيزات منخفضة من DTT (أقل من 1 مم).هذه الميزة تجعلها مناسبة للاستخدام في التفاعلات التي تكون فيها التركيزات العالية من DTT ضارة بالتفاعل (على سبيل المثال، RT-PCR في الوقت الحقيقي).
Aتطبيق
يمكن استخدام هذا المنتج على نطاق واسع في أي تجربة حيث يكون تدخل RNase ممكنًا لتجنب تدهور الحمض النووي الريبي (RNA)، مثل:
1.توليف الشريط الأول من [كدنا]، RT-PCR، RT-qPCR، إلخ.
2.يحمي الحمض النووي الريبي (RNA) من التدهور أثناء النسخ/الترجمة في المختبر (على سبيل المثال، في نظام النسخ المتماثل للفيروس في المختبر).
3.تثبيط نشاط RNase أثناء فصل الحمض النووي الريبي (RNA) وتنقيته.
شروط التخزين
يمكن تخزين المنتج في درجة حرارة -25～-15 درجة مئوية، صالح لمدة عامين.
المخزن المؤقت للتخزين
50 ملي بوكل، 20 ملي هيبيس-كوه (الرقم الهيدروجيني 7.6، 25 درجة مئوية)، 8 ملي DTT و 50٪ جلسرين.
تعريف الوحدة
تم تعريف كمية مثبط RNase الفئران المطلوبة لتثبيط نشاط 5 نانوغرام من الريبونوكلياز A بنسبة 50٪ على أنها وحدة واحدة (U).
الوزن الجزيئي للبروتين
الوزن الجزيئي لمثبط RNase الفئران هو 50 كيلو دالتون.
رقابة جودة
نوكلياز خارجي نشاط:
40 وحدة من مثبط RNase الفأري مع 1 ميكروغرام α -Hind III لهضم الحمض النووي عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة لا ينتج عنه أي تدهور كما هو محدد بواسطة الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز.
نشاط نوكلياز:
40 وحدة من مثبط RNase الفأري مع 1μ جم γ DNA عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة لا ينتج عنه أي تدهور كما هو محدد بواسطة الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز.
نيكينغ نشاط:
40U من مثبط RNase الفأري مع 1μ جم pBR322 عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة لا ينتج عنه أي تدهور كما هو محدد بواسطة الفصل الكهربائي لهلام الاغاروز.
رناسي نشاط:
40U من مثبط RNase الفأري مع 1.6μ جم MS2 RNA لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية لا ينتج عنه أي تدهور كما هو محدد بواسطة الفصل الكهربائي لهلام الاغاروز.
E.الحمض النووي القولوني:
يتم فحص 40 وحدة من مثبط RNase الفئران بحثًا عن وجود الحمض النووي الجينومي لـ E. coli باستخدام TaqMan qPCR مع الاشعال الخاصة بموضع E. coli 16S rRNA.يبلغ تلوث الحمض النووي الجينومي لـ E. coli ≥ 0.1 بيكوغرام / 40 وحدة.
Notes
1. التذبذب العنيف أو التحريك سيؤدي إلى تعطيل الإنزيم.
2. كان نطاق درجة الحرارة الأمثل لهذا المانع هو 25-55 درجة مئوية، وتم تعطيله عند 65 درجة مئوية وما فوق.
3. لم يتم تثبيط أنشطة RNase H وRNase 1 وRNase T1 بواسطة مثبط RNase الفئران.
4. تم العثور على تثبيط نشاط RNase في نطاق واسع من الأس الهيدروجيني (الأس الهيدروجيني 5-9 كان كله نشطًا)، ولوحظ أعلى نشاط عند الأس الهيدروجيني 7-8.
5. بما أن الريبونوكلياز يحتفظ عادةً بالنشاط في ظل ظروف تغيير طبيعة، يجب توخي الحذر لتجنب تغيير طبيعة جزيئات مثبط RNase التي تعقدت مع ريبونوكلياز.لمنع إطلاق الريبونوكلياز النشط، يجب تجنب درجات الحرارة التي تزيد عن 50 درجة مئوية والتركيزات العالية من اليوريا أو عوامل تغيير الطبيعة الأخرى.
