5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
رقم القط: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) عبارة عن مزيج قائم على مسبار أحادي الأنبوب عالي الثبات ومناسب للنسخ العكسي بخطوة واحدة وPCR الكمي (qRT-PCR).وهو يدعم الخلط المسبق للبادئات والمسبارات ويظل ثابتًا بعد التخزين لفترة طويلة في درجة حرارة منخفضة.يمكن إضافة العينة المراد اختبارها مباشرة عند الاستخدام، دون الحاجة إلى فتح الأنبوب/عملية الماصة الإضافية.يوفر هذا المنتج مكونات، على سبيل المثال بوليميريز الحمض النووي ذو البداية الساخنة، M-MLV، جليكوزيلاز الحمض النووي اليوراسيل المتغير بالحرارة (TS-UNG)، مثبط RNase، MgCl2وdNTPs (مع dUTP بدلاً من dTTP) والمثبتات.مع النسخ العكسي للتضخيم السريع المعدل وراثيًا وبوليميراز الحمض النووي، من الممكن إكمال تضخيم PCR في غضون 20-40 دقيقة.يستخدم هذا الكاشف مخزنًا مؤقتًا خاصًا لـ qPCR مع إنزيمات مختلطة من إنزيم التضخيم المضاد للمثبط وإنزيم UNG.ولذلك، يمكن الحصول على تضخيم جيد للجينات المستهدفة ومنع التضخيم الكاذب الناجم عن بقايا PCR وتلوث الهباء الجوي.هذا الكاشف متوافق مع معظم أدوات PCR الكمية الفلورية من الشركات المصنعة مثل Applied Biosystems، وEppendorf، وBio-Rad، وRoche.
عنصر
1.25 × نيوسكريبت سريع RTase/UNG ميكس
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
شروط التخزين
ينبغي حفظ جميع المكونات عند -20 درجة مئوية للتخزين طويل الأمد و4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر.يرجى الخلط جيدًا بعد الذوبان والطرد المركزي قبل الاستخدام.تجنب التجميد والذوبان المتكرر.
إعداد نظام التفاعل qRT-PCR
| عناصر | 25ميكرولترنظام | 50ميكرولترنظام | التركيز النهائي |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5 ميكرولتر | 10 ميكرولتر | 1× |
| 25 × نيوسكريبت سريع RTase/UNG ميكس | 1 ميكرولتر | 2 ميكرولتر | 1× |
| 25 × مزيج مسبار التمهيديa | 1 ميكرولتر | 2 ميكرولتر | 1× |
| قالب الحمض النووي الريبيb | - | - | - |
| ddH2O | ما يصل إلى 25 ميكرولتر | ما يصل إلى 50 ميكرولتر | - |
1) أ. يكون التركيز النهائي للبرايمر عادة 0.2 ميكرومتر.للحصول على نتائج أفضل، يمكن تحسين تركيز التمهيدي ضمن نطاق 0.2-1μM.بشكل عام، يمكن تحسين تركيز المسبار ضمن نطاق 0.1-0.3μM.
2) ب. عند استخدام إجراء PCR سريع، قد تؤدي زيادة تركيز البادئات والمسابير إلى نتائج تضخيم أفضل، وينبغي تحسين نسبتها وفقًا لذلك.
3) تحتوي الأنواع المختلفة من العينات على أنواع ومحتوى مختلف من المثبط وعدد نسخ الجين المستهدف.وينبغي النظر في حجم العينة حسب الحالة الفعلية.قم بتخفيف العينة باستخدام الماء الخالي من النيوكلياز أو المخزن المؤقت TE، إذا لزم الأمر.
رد الفعل جالشروط
| إجراء PCR العادي | إجراء PCR سريع | ||||||
| إجراء | درجة حرارة. | وقت | دورة | إجراء | درجة حرارة. | وقت | دورة |
| النسخ العكسي | 50 درجة مئوية | 10-20 دقيقة | 1 | النسخ العكسي | 50 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
| بوليميريز التنشيط | 95 درجة مئوية | 1-5 دقائق | 1 | بوليميريز التنشيط | 95 درجة مئوية | 30 ثانية | 1 |
| تمسخ | 95 درجة مئوية | 10-20 ثانية | 40-50 | تمسخ | 95 درجة مئوية | 1-3ث | 40-50 |
| التلدين و امتداد | 56-64 درجة مئوية | 20-60 ثانية | التلدين و امتداد | 56-64 درجة مئوية | 3-20 ثانية | ||
رقابة جودة
1.الكشف عن الوظيفة: الحساسية والنوعية والتكرار لـ qPCR.
2.لا يوجد نشاط نوكلياز خارجي: لا يوجد نوكلياز خارجي وتلوث نوكلياز خارجي.
ملحوظات
1.معدل تضخيم بوليميريز الحمض النووي السريع لا يقل عن 1 كيلو بايت / 10 ثانية.تتميز أدوات PCR المختلفة بسرعات تسخين وتبريد مختلفة، وأوضاع للتحكم في درجة الحرارة والتوصيل الحراري، وبالتالي يعد تحسين تركيز التمهيدي/المسبار وطريقة التشغيل بالاشتراك مع أداة PCR السريعة المحددة أمرًا ضروريًا.
2.هذا المنتج يؤدي قابلية تطبيق واسعة، وهو مناسب للتشخيص الجزيئي عالي الحساسية.يوصى باستخدام طريقة PCR ثلاثية الخطوات للبادئات ذات درجة حرارة التلدين المنخفضة أو لتضخيم الأجزاء الطويلة التي تزيد عن 200 نقطة أساس.
3.نظرًا لأن الأمبليكونات المختلفة لها كفاءة استخدام مختلفة لـ dUTP وحساسية مختلفة لـ UNG، يجب تحسين الكواشف إذا انخفضت حساسية الكشف عند استخدام نظام UNG.يرجى الاتصال بنا للحصول على الدعم الفني إذا لزم الأمر.
4.لتجنب تضخيم منتجات PCR المرحل، هناك حاجة إلى منطقة تجريبية مخصصة وماصة للتضخيم.استخدم القفازات وقم بالتغيير بشكل متكرر ولا تفتح أنبوب PCR بعد التضخيم.
