مثبط Rnase (خالي من الجلسرين)
مثبط RNase الفئران هو مثبط RNase الفئران المؤتلف معبر عنه ومنقى من الإشريكية القولونية.وهو يرتبط بـ RNase A أو B أو C بنسبة 1:1 من خلال روابط غير تساهمية، وبالتالي يثبط نشاط الإنزيمات الثلاثة ويحمي الحمض النووي الريبي (RNA) من التحلل.ومع ذلك، فهو غير فعال ضد RNase 1 أو RNase T1 أو S1 Nuclease أو RNase H أو RNase من الرشاشيات.تم اختبار مثبط Murine RNase بواسطة RT-PCR وRT-qPCR وIVT mRNA، وكان متوافقًا مع العديد من النسخ العكسية التجارية وبوليميرات DNA وبوليميرات RNA.
بالمقارنة مع مثبطات RNase البشرية، لا يحتوي مثبط RNase الفأري على اثنين من السيستين الحساسة للغاية للأكسدة التي تسبب تعطيل نشاط المانع.مما يجعلها مستقرة عند تركيزات منخفضة من DTT (أقل من 1 مم).هذه الميزة تجعلها مناسبة للاستخدام في التفاعلات التي تكون فيها التركيزات العالية من DTT ضارة بالتفاعل (على سبيل المثال، RT-PCR في الوقت الحقيقي).
Aتطبيق
يمكن استخدام هذا المنتج على نطاق واسع في أي تجربة حيث يكون تدخل RNase ممكنًا لتجنب تدهور الحمض النووي الريبي (RNA)، مثل:
1. توليف [كدنا] الأول، RT-PCR، RT-qPCR، وما إلى ذلك؛
2. حماية الحمض النووي الريبي (RNA) من التدهور في النسخ/الترجمة في المختبر (مثل تكاثر الفيروس في المختبر)؛
3. تثبيط نشاط RNase أثناء عزل وتنقية الحمض النووي الريبي (RNA).
شروط التخزين
يُخزن في درجة حرارة -25～-15 درجة مئوية؛
دورات التجميد والذوبان ≥ 5 مرات؛
صالحة لمدة 1 سنة.
تعريف الوحدة
يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية مثبط RNase المطلوبة لمنع نشاط 5 نانوغرام من RNase A بنسبة 50%.
الوزن الجزيئي الغرامي
مثبط RNase (خالي من الجلسرين) هو بروتين 50 كيلو دالتون.
رقابة جودة
نوكلياز خارجي نشاط:
أدى حضانة 40 وحدة من الإنزيم مع 1 ميكروغرام من الحمض النووي LA-Hind III لهضم الحمض النووي لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية إلى عدم وجود تدهور يمكن اكتشافه في الحمض النووي كما هو محدد بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
نشاط نوكلياز:
أدى حضانة 40 وحدة من الإنزيم مع 1 ميكروجرام من الحمض النووي لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية إلى عدم وجود تدهور يمكن اكتشافه في الحمض النووي كما هو محدد بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
نيكينغ نشاط:
أدى حضانة 40 وحدة من الإنزيم مع 1 ميكروغرام من pBR322 لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية إلى عدم وجود تدهور يمكن اكتشافه في الحمض النووي كما هو محدد بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
رناسي نشاط:
أدى حضانة 40 وحدة من الإنزيم مع 1.6 ميكروغرام من MS2 RNA لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية إلى عدم وجود تدهور ملحوظ في الحمض النووي الريبي (RNA) كما هو محدد بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
E.الحمض النووي القولوني:
تم الكشف عن 40 U من الإنزيم بواسطة TaqMan qPCR.الحمض النووي للإشريكية القولونية هو ≥ 0.1pg/40U.
Notes
1. لا تهز أو تحرك بعنف لمنع تعطيل الإنزيم.
2. مثبط RNase نشط في درجات حرارة تتراوح من 25 درجة مئوية إلى 55 درجة مئوية ويتم تعطيله عند ≥65 درجة مئوية.
3. لا يتم تثبيط نشاط RNase H وRNase 1 وRNase T1.
4. نطاق الأس الهيدروجيني لتثبيط نشاط RNase واسع (نشط عند الرقم الهيدروجيني 5-9)، ويظهر أقصى نشاط عند الرقم الهيدروجيني 7-8.
