خطوة واحدة RT-qPCR SYBR Green Premix
رقم القط: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix مخصص لتقدير التألق استنادًا إلى صبغة SYBR Green I.باستخدام الاشعال الخاص بالجينات، يتم إكمال النسخ العكسي وتفاعلات qPCR في أنبوب واحد، مما يلغي الحاجة إلى عمليات فتح الغطاء وسحب الأنابيب المتكررة، مما يحسن بشكل كبير من كفاءة الفحص ويقلل من خطر التلوث.بالنسبة لعينات الحمض النووي الريبي (RNA)، تستخدم المجموعة إنزيم Reverse Transcriptase المقاوم للحرارة لتخليق cDNA الفعال وHotStart Taq DNA Polymerase للتضخيم الكمي.في ظل نظام المخزن المؤقت الأمثل، يمكن أن تصل حساسية المجموعة إلى 0.1 بيكوغرام للأهداف التي يتم التعبير عنها بشكل كبير وتصل إلى 1 بيكوغرام للأهداف التي يتم التعبير عنها بشكل معتدل.هذه المجموعة مناسبة لتضخيم وتقدير عينات الحمض النووي.فهو يتيح الكشف الحساس والتقدير الكمي للأحماض النووية من عينات نباتية وحيوانية مختلفة، والخلايا والكائنات الحية الدقيقة.
عناصر
| No | اسم | مقدار | مقدار |
| 1 | المخزن المؤقت المتقدم | 250 ميكرولتر | 2×1.25 مل |
| 2 | مزيج انزيم متقدم | 20 ميكرولتر | 200 ميكرولتر |
| 3 | ريبونوكلياز الحرة H2O | 250 ميكرولتر | 2×1.25 مل |
شروط التخزين
يجب تخزين هذا المنتج في درجة حرارة -25 ~ -15 درجة مئوية بعيدًا عن الضوء لمدة عام واحد.
تعليمات
1. تكوين نظام التفاعلd
| عناصر | الحجم (ميكروليتر) | الحجم (ميكروليتر) | التركيز النهائي |
| المخزن المؤقت المتقدم | 12.5 | 25 | 1× |
| مزيج انزيم متقدم | 1 | 2 | - |
| التمهيدي إلى الأمام (10 ميكرومول / لتر)a | 0.5 | 1 | 0.2 ميكرومول/لتر |
| التمهيدي العكسي (10 ميكرومول/لتر)a | 0.5 | 1 | 0.2 ميكرومول/لتر |
| قالب الحمض النووي الريبيb | X | X | - |
| ريبونوكلياز الحرة H2ياc | إلى 25 | إلى 50 | - |
ملحوظات:
1) أ.تكان تركيز التمهيدي النهائي 0.2 ميكرومول/لتر، والذي يمكن تعديله أيضًا بين 0.1 و1 ميكرومول/لتر حسب الاقتضاء.
2) ب.الكاشف حساس للغاية، مع إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA) في نطاق 1pg-1μg، وأظهر اختبار العينات البشرية مدخلاً مثاليًا قدره 1 pg-100 ng، مع التحكم في قيمة Ct الإجمالية في نطاق 15-30 حسب الاقتضاء.
3) ج.يوصى باستخدام 20 ميكرولتر أو 50 ميكرولتر لضمان صلاحية وإمكانية تكرار نتائج تضخيم الجينات المستهدفة.
4) د.يرجى التحضير في المقعد فائق النظافة واستخدام النصائح وأنابيب التفاعل الخالية من بقايا نوكلياز؛يوصى باستخدام النصائح مع خراطيش الفلتر.تجنب التلوث المتبادل وتلوث الهباء الجوي.
2.برنامج رد الفعل
| خطوة دورة | درجة حرارة. | وقت | دورات |
| النسخ العكسي | 50 درجة مئويةa | 6 دقائق | 1 |
| تمسخ الأولي | 95 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
| رد فعل التضخيم | 95 درجة مئوية | 15 ثانية | 40 |
| 60 درجة مئويةb | 30 ثانية | ||
| مرحلة منحنى الانصهار | افتراضيات الصك | 1 | |
ملحوظات:
1) أ.يمكن اختيار درجة حرارة النسخ العكسي بين 50-55 درجة مئوية وفقًا للاحتياجات التجريبية.بالنسبة لعينات الحمض النووي، يمكن حذف عملية النسخ العكسي.
2) ب.في حالات خاصة، يمكن تعديل درجة حرارة التلدين/التمديد وفقًا لقيمة التمهيدي Tm، ويوصى بـ 60 درجة مئوية.
ملحوظات
1. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
2. يرجى العمل باستخدام معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة، من أجل سلامتك.
