بروتيناز K NGS (مسحوق)
رقم القط: HC4507A
NGS Protease K هو بروتياز سيرين مستقر مع نشاط إنزيم عالي وخصوصية واسعة للركيزة. يقوم الإنزيم بشكل تفضيلي بتحليل روابط الإستر وروابط الببتيد المجاورة للمحطة C للأحماض الأمينية الكارهة للماء والأحماض الأمينية المحتوية على الكبريت والأحماض الأمينية العطرية.لذلك، غالبًا ما يستخدم لتحليل البروتينات إلى ببتيدات قصيرة.NGS Protease K هو بروتياز سيرين نموذجي مع Asp39-له69-سر224الثالوث التحفيزي الذي تنفرد به البروتيازات السيرينية، ويحيط بالمركز الحفزي سحبان من الكالسيوم2+مواقع الربط لتحقيق الاستقرار، والحفاظ على نشاط الإنزيم العالي في ظل نطاق أوسع من الظروف.
تخصيص
| مظهر | مسحوق غير متبلور أبيض إلى أبيض مصفر، مجفف بالتجميد |
| نشاط معين | ≥40U/mg الصلبة |
| الدناز | أيا الكشف |
| رناسي | أيا الكشف |
| العبء الحيوي | ≥50CFU/جم مادة صلبة |
| بقايا الحمض النووي | <5pg/mg الصلبة |
ملكيات
| مصدر | ألبوم تريتيراتشيوم |
| رقم المفوضية الأوروبية | 3.4.21.64(مؤتلف من ألبوم Tritirachium) |
| الوزن الجزيئي الغرامي | 29 كيلو دالتون (SDS-PAGE) |
| نقطة تساوي الكهربية | 7.81 الشكل 1 |
| الرقم الهيدروجيني الأمثل | 7.0-12.0 (الجميع يؤدون نشاطًا عاليًا) الشكل 2 |
| درجة الحرارة المثلى | 65 درجة مئوية الشكل 3 |
| استقرار الرقم الهيدروجيني | الرقم الهيدروجيني 4.5-12.5 (25 درجة مئوية، 16 ساعة) الشكل 4 |
| الاستقرار الحراري | أقل من 50 درجة مئوية (درجة الحموضة 8.0، 30 دقيقة) الشكل 5 |
| استقرار التخزين | مخزنة عند درجة حرارة 25 درجة مئوية لمدة 12 شهرًا الشكل 6 |
| المنشطات | الحزب الديمقراطي الصربي، واليوريا |
| مثبطات | ثنائي إيزوبروبيل فلوروفوسفات؛فلوريد البنزيل سلفونيل |
شروط التخزين
قم بتخزين المسحوق المجفف بالتجميد عند درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية لفترة طويلة بعيدًا عن الضوء؛بعد الذوبان، قم بتقسيمه إلى حجم مناسب للتخزين قصير المدى عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية بعيدًا عن الضوء أو التخزين طويل المدى عند -25~-15 درجة مئوية بعيدًا عن الضوء.
احتياطات
قم بارتداء القفازات والنظارات الواقية عند الاستخدام أو الوزن، وحافظ على التهوية الجيدة بعد الاستخدام.قد يسبب هذا المنتج رد فعل تحسسي للجلد وتهيجًا خطيرًا للعين.وفي حالة استنشاقه قد يسبب أعراض الحساسية أو الربو أو ضيق التنفس.قد يسبب تهيج الجهاز التنفسي.
تعريف الوحدة
يتم تعريف وحدة واحدة من NGS Protease K على أنها كمية الإنزيم المطلوبة لتحلل الكازين إلى 1 ميكرومول L-تيروزين في ظل ظروف التحديد القياسية.
تحضير الكواشف
| كاشف | الصانع | فهرس |
| الكازين الفنيمن حليب البقر | سيجما الدريخ | C7078 |
| هيدروكسيد الصوديوم | سينوفارم كيميكالشركة الكاشف المحدودة | 10019762 |
| ناه2PO4· ساعتان2O | سينوفارم كيميكالشركة الكاشف المحدودة | 20040718 |
| Na2HPO4 | سينوفارم كيميكالشركة الكاشف المحدودة | 20040618 |
| حمض الخليك ثلاثي الكلور | سينوفارم كيميكالشركة الكاشف المحدودة | 80132618 |
| أسيتات الصوديوم | سينوفارم كيميكالشركة الكاشف المحدودة | 10018818 |
| حمض الاسيتيك | سينوفارم كيميكالشركة الكاشف المحدودة | 10000218 |
| حمض الهيدروكلوريك | سينوفارم كيميكالشركة الكاشف المحدودة | 10011018 |
| كربونات الصوديوم | سينوفارم كيميكالشركة الكاشف المحدودة | 10019260 |
| الفولين الفينول | سانجون للتكنولوجيا الحيوية (شنغهاي)المحدودة | A500467-0100 |
| لام تيروزين | سيجما | 93829 |
الكاشف الأول:
الركيزة: 1٪ كازين من محلول الحليب البقري: قم بإذابة 1 جرام من كازين الحليب البقري في 50 مل من محلول فوسفات الصوديوم 0.1 م، درجة الحموضة 8.0، سخن في حمام مائي عند 65-70 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، حركه ثم إذابه، برده بالماء، وضبطه بواسطة هيدروكسيد الصوديوم إلى الرقم الهيدروجيني 8.0، ويخفف إلى 100 مل.
الكاشف الثاني:
محلول TCA: 0.1 م حمض ثلاثي كلورو أسيتيك، 0.2 م أسيتات صوديوم و 0.3 م حمض أسيتيك (وزن 1.64 جم حمض ثلاثي كلورو أسيتيك + 1.64 جم أسيتات صوديوم + 1.724 مل حمض أسيتيك على التوالي، أضف 50 مل ماء منزوع الأيونات، اضبط باستخدام حمض الهيدروكلوريك إلى درجة حموضة 4.03، وخفف في 100 مل).
الكاشف الثالث:
0.4 م من محلول كربونات الصوديوم (وزن 4.24 جم من كربونات الصوديوم اللامائية وتذوب في 100 مل من الماء)
الكاشف الرابع:
كاشف فولين فينول: يخفف 5 مرات بالماء منزوع الأيونات.
الكاشف الخامس:
مخفف الإنزيم: 0.1 م محلول فوسفات الصوديوم، الرقم الهيدروجيني 8.0.
الكاشف السادس:
محلول L-تيروزين القياسي: 0، 0.005، 0.025، 0.05، 0.075، 0.1، 0.25 أومول/مل L-تيروزين مذاب مع 0.2M حمض الهيدروكلوريك.
إجراء
1. قم بتشغيل مقياس الطيف الضوئي للأشعة فوق البنفسجية وحدد القياس الضوئي.
2. اضبط الطول الموجي على 660 نانومتر.
3. قم بتشغيل الحمام المائي، واضبط درجة الحرارة على 37 درجة مئوية، وتأكد من عدم تغيير درجة الحرارة لمدة 3-5 دقائق.
4. قم بتسخين الركيزة بمقدار 0.5 مل في أنبوب طرد مركزي سعة 2 مل عند حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
5. استخرج 0.5 مل من محلول الإنزيم المخفف في أنبوب الطرد المركزي المسخن لمدة 10 دقائق.تعيين انزيم مخفف كمجموعة فارغة.
6. أضف 1.0 مل من كاشف TCA مباشرة بعد التفاعل.تخلط المكونات جيداً وتوضع في حمام مائي لمدة 30 دقيقة.
7. حل رد الفعل بالطرد المركزي.
8. قم بإضافة المكونات التالية بالترتيب المحدد.
| كاشف | مقدار |
| طاف | 0.5 مل |
| 0.4 م كربونات الصوديوم | 2.5 مل |
| كاشف فولين الفينول | 0.5 مل |
9. اخلط جيدًا قبل حضانة الدجاج في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
10. التطوير التنظيمي660تم تحديده على أنه OD1;مجموعة التحكم الفارغة: يتم استخدام مخفف الإنزيم ليحل محل محلول الإنزيم لتحديد OD660كما التطوير التنظيمي2، ΔOD=OD1-OD2.
11. المنحنى القياسي L-tyrosine: 0.5 مل محلول L-tyrosine بتركيز مختلف، 2.5 مل 0.4 م كربونات الصوديوم، 0.5 مل كاشف فولين فينول في أنبوب طرد مركزي 5 مل، احتضان في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، كشف عن OD660لتركيزات مختلفة من L-tyrosine، ثم الحصول على المنحنى القياسي Y=kX+b، حيث Y هو تركيز L-tyrosine، X هو OD600.
عملية حسابية
2: الحجم الإجمالي لمحلول التفاعل (مل)
0.5: حجم محلول الإنزيم (مل)
0.5: حجم سائل التفاعل المستخدم في تحديد اللونية (مل)
10: وقت رد الفعل (دقيقة)
Df: التخفيف المتعدد
C: تركيز الإنزيم (ملجم/مل)
الأرقام
الشكل 1: بقايا الحمض النووي
| عينة | افي C4 | حمض نووي الانتعاش (صفحة / ملغ) | استعادة(٪) | المجموع النووي حمض ( بيكوغرام / ملغ) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| بي آر كيه + إس تي دي2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| الأمراض المنقولة جنسيا1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| الأمراض المنقولة جنسيا2 | 16 | |||
| الأمراض المنقولة جنسيا3 | 19.125 | |||
| الأمراض المنقولة جنسيا4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA خالي من H2O | غير محدد | — | — | — |
الشكل 2: الرقم الهيدروجيني الأمثل
الشكل 3 درجة الحرارة المثلى
الشكل 4: استقرار الرقم الهيدروجيني
الشكل 5: الاستقرار الحراري
الشكل 6: استقرار التخزين عند 25 درجة مئوية
