رنيز أ
Ribonuclease A (RNaseA) عبارة عن عديد ببتيد مفرد تقطعت به السبل يحتوي على 4 روابط ثاني كبريتيد بوزن جزيئي يبلغ حوالي 13.7 كيلو دالتون.RNase هو نوكلياز داخلي يعمل على تحليل الحمض النووي الريبي (RNA) المفرد الذين تقطعت بهم السبل في بقايا C وU.على وجه التحديد، يتعرف الانقسام على رابطة فوسفوديستر المكونة من ريبوز 5' من النيوكليوتيد ومجموعة الفوسفات على ريبوز 3' من نيوكليوتيد البيريميدين المجاور، بحيث يتم تحلل الفوسفات الحلقي 2،3' إلى 3 المقابل. 'فوسفات النيوكليوزيد (على سبيل المثال، يتم شق pG-pG-pC-pA-pG بواسطة RNase A لتوليد pG-pG-pCp وA-PG).RNase A هو الأكثر نشاطًا في تقطيع الحمض النووي الريبي المفرد الذي تقطعت به السبل.تركيز العمل الموصى به هو 1-100 ميكروجرام/مل، وهو متوافق مع أنظمة التفاعل المختلفة.يمكن استخدام تركيز الملح المنخفض (0-100 ملي مولار كلوريد الصوديوم) لقطع سلاسل الحمض النووي الريبي (RNA) المفرد، والحمض النووي الريبي (RNA) المزدوج، وسلاسل الحمض النووي الريبي (RNA) التي تكونت عن طريق تهجين الحمض النووي الريبي (RNA-DNA).
ومع ذلك، عند تركيز الملح العالي (≥0.3 م)، فإن RNase A يشق فقط الحمض النووي الريبي المفرد الذي تقطعت به السبل على وجه التحديد.
يستخدم RNase A بشكل شائع لإزالة الحمض النووي الريبي (RNA) أثناء تحضير الحمض النووي البلازميد أو الحمض النووي الجينومي.ما إذا كان DNase نشطًا أثناء عملية التحضير أم لا يمكن أن يؤثر بسهولة على التفاعل.يمكن استخدام الطريقة التقليدية للغليان في حمام مائي لتعطيل نشاط الدناز.لا يحتوي هذا المنتج على الدناز والبروتياز، ولا يحتاج إلى معالجة حرارية قبل الاستخدام.بالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضًا استخدام هذا المنتج في تجارب البيولوجيا الجزيئية مثل تحليل حماية RNase وتحليل تسلسل RNA.
شروط التخزين
يجب تخزين المنتج في درجة حرارة -25 درجة مئوية ~ - 15 درجة مئوية لمدة عامين.
تحديد
| مظهر | مسحوق |
| كمية | 100 ملغ / 1 جرام |
| نوع المنتج | رناسي أ |
تعليمات
هذه إحدى الطرق الشائعة لإعداد حل تخزين RNase A.ويمكن أيضا أن تكون مستعدةبطرق أخرى حسب الطرق التقليدية المخبرية أو المرجعية (مثليذوب مباشرة في 10 مللي مولار Tris-HCl، درجة الحموضة 7.5 أو محلول Tris-NaCl)
استخدم 10 ملي خلات الصوديوم (الرقم الهيدروجيني 5.2) لإعداد 10 ملغ/مل من محلول تخزين RNase A.
2. التسخين عند 100 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
3. برد إلى درجة حرارة الغرفة، أضف 1/10 حجم 1 M Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 7.4)، اضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 (لـعلى سبيل المثال، أضف 500 مل من 10 ملغ/مل محلول تخزين RNase 1 M Tris-HCl، pH7.4).
4. يتم تعبئتها في درجة حرارة -20 درجة مئوية للتخزين المجمد، والتي يمكن أن تكون مستقرة لمدة تصل إلى عامين.
[ملحوظات]:
عند غليان محلول RNaseA في ظل ظروف محايدة، سوف يتشكل ترسيب RNase؛قم بغليه عند درجة حموضة أقل، وإذا كان هناك هطول يمكن ملاحظة ذلك، والذي قد يكون بسبب وجود شوائب البروتين.إذا تم العثور على رواسب بعد الغليان، فيمكن إزالة الشوائب عن طريق الطرد المركزي عالي السرعة (13000 دورة في الدقيقة)، ثم تعبئتها فرعيًا لتخزينها بالتجميد.
ملحوظات
يرجى ارتداء معدات الوقاية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك.
