إنزيمات UDG/UNG
يمكن لـ UDG (يوراسيل DNA جليكوزيلاز) تحفيز التحلل المائي للرابط N-glycosidic بين قاعدة اليوراسيل والعمود الفقري للسكر والفوسفات في ssDNA وdsDNA.يمكنه التحكم بسهولة في تلوث الهباء الجوي وهو مناسب لأنظمة البيولوجيا الجزيئية الشائعة مثل PCR وqPCR وRT-qPCR وLAMP.
تحديد
| مضيف التعبير | المؤتلف E. القولونية مع جين اليوراسيل DNA جليكوزيلاز |
| الوزن الجزيئي الغرامي | 24.8 كيلو دالتون |
| نقاء | ≥95% (SDS-PAGE) |
| تعطيل الحرارة | 95 درجة مئوية، 5 ~ 10 دقائق |
| تعريف الوحدة | يتم تعريف وحدة واحدة (U) على أنها كمية الإنزيم المطلوبة لتحفيز التحلل المائي للـ dsDNA المحتوي على l μg dU في 30 دقيقة عند 25 درجة مئوية. |
تخزين
يجب تخزين المنتج في درجة حرارة -25 درجة مئوية ~ -15 درجة مئوية لمدة عامين.
تعليمات
1.تحضير خليط تفاعل PCR وفق النظام التالي
| عناصر | الحجم (ميكروليتر) | التركيز النهائي |
| 10 × PCR العازلة (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 مليمول/LMgCl | 3 | 1.5 ملمول/لتر |
| دوتب (10 مليمول / لتر) | 3 | 0.6 ملمول/لتر |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 مليمول/ليتش) | 1 | 0.2 ملمول/لتر |
| قالب الحمض النووي | X | - |
| التمهيدي 1 (10 ميكرومول / لتر) | 2 | 0.4 ميكرومول/لتر |
| التمهيدي 2 (10 ميكرومول / لتر) | 2 | 0.4 ميكرومول/لتر |
| طق بوليميريز الحمض النووي (5 وحدة/ميكروليتر) | 0. 5 | 0.05 وحدة/ميكروليتر |
| يوراسيل DNA جليكوسيلاز (UDG/UNG)، 1 وحدة/ميكروليتر | 1 | 1 وحدة/ميكروليتر |
| ddH₂O | ما يصل إلى 50 | - |
ملحوظة: وفقا للمتطلبات التجريبية، يمكن تعديل التركيز النهائي لـ dUTP بين 0.2-0.6 مليمول/لتر، ويمكن إضافة 0.2 مليمول/لتر dTTP بشكل انتقائي.
2.إجراء التضخيم
| خطوة دورة | درجة حرارة | وقت | دورات |
| du التي تحتوي على تدهور القالب | 25 درجة مئوية | 10 دقائق | 1 |
| تفعيل UDG، تمسخ القالب الأولي | 95 درجة مئوية | 5 ~ 10 دقائق | 1 |
| تمسخ | 95 درجة مئوية | 10 ثانية |
30-35 |
| التلدين | 60 درجة مئوية | 20 ثانية | |
| امتداد | 72 درجة مئوية | 30 ثانية/كيلو بايت | |
| التمديد النهائي | 72 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
ملحوظة: يمكن تعديل وقت التفاعل عند 25 درجة مئوية خلال 5-10 دقائق وفقًا للمتطلبات التجريبية.
ملحوظات
1.UDG نشط في معظم المخازن المؤقتة لتفاعل PCR.
2.يجب تخزين الإنزيمات في صندوق ثلج أو في حمام جليدي عند استخدامها، ويجب تخزينها عند -20 درجة مئوية مباشرة بعد الاستخدام.
3.يرجى ارتداء معدات الوقاية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك!
