وايلد طق DNA بوليميريز
Taq DNA Polymerase هو بوليميريز DNA قابل للحرارة من Thermus aquaticus YT-1، الذي يمتلك نشاط بوليميريز 5′→3′ ونشاط نوكلياز داخلي 5´.
عناصر
| عنصر | HC1010 أ-01 | HC1010 أ-02 | HC1010 أ-03 | HC1010 أ-04 |
| 10× طاق عازلة | 2×1 مل | 2×10 مل | 2×50 مل | 5×200 مل |
| طق بوليميريز الحمض النووي (5 وحدة/ميكروليتر) | 0.1 مل | 1 مل | 5 مل | 5×10 مل |
حالة التخزين
النقل تحت 0 درجة مئوية ويتم تخزينه في -25 درجة مئوية ~ -15 درجة مئوية.
تعريف الوحدة
يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية الإنزيم الذي يدمج 15 نانومول من dNTP في مادة حمضية غير قابلة للذوبان في 30 دقيقة عند 75 درجة مئوية.
رقابة جودة
1.فحص نقاء البروتين (SDS-PAGE):تم تحديد نقاء بوليميريز DNA Taq بنسبة ≥95٪ عن طريق تحليل SDS-PAGE.
2.Endنشاط نوكلياز:ما لا يقل عن 5 U من بوليميريز الحمض النووي Taq مع 1 ميكروغرام من DNA لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية لا يؤدي إلى أي تدهور يمكن اكتشافه كما هو محدد.
3.نشاط نوكلياز:ما لا يقل عن 5 U من بوليميريز الحمض النووي Taq مع 1 ميكروغرام α -Hind Ⅲ يهضم الحمض النووي لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية لا يؤدي إلى أي تدهور يمكن اكتشافه كما هو محدد.
4.نشاط نيكاس:ما لا يقل عن 5 U من بوليميريز الحمض النووي Taq مع 1 ميكروغرام من الحمض النووي pBR322 لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية لا يؤدي إلى أي تدهور يمكن اكتشافه كما هو محدد.
5.نشاط ريبونوكلياز:ما لا يقل عن 5 U من بوليميريز الحمض النووي Taq مع 1.6 ميكروغرام MS2 RNA لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية لا يؤدي إلى أي تدهور يمكن اكتشافه كما هو محدد.
6.بكتريا قولونيةالحمض النووي:يتم فحص 5 U من بوليميريز الحمض النووي Taq بحثًا عن وجود الحمض النووي الجيني لـ E. coli باستخدام TaqMan qPCR مع الاشعال الخاصة بموضع E. coli 16S rRNA.تلوث الحمض النووي الجينومي لـ E. coli هو ≥1 نسخة.
7.تضخيم PCR (5.0 كيلو بايت Lambda DNA)- تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على 5 نانوغرام من DNA Lambda مع 5 وحدات من Taq DNA Polymerase لمدة 25 دورة من تضخيم PCR يؤدي إلى المنتج المتوقع بحجم 5.0 كيلو بايت.
إعداد رد الفعل
| عناصر | مقدار |
| قالب الحمض النوويa | خياري |
| 10 ميكرومتر التمهيدي إلى الأمام | 1 ميكرولتر |
| 10 ميكرومتر عكس التمهيدي | 1 ميكرولتر |
| مزيج dNTP (10 مم لكل منهما) | 1 ميكرولتر |
| 10 × طاق عازلة | 5 ميكرولتر |
| طق DNA بوليميريزب | 0.25 ميكرولتر |
| مياه خالية من نوكلياز | ما يصل إلى 50 ميكرولتر |
ملحوظات:
1) يختلف تركيز التفاعل الأمثل للقوالب المختلفة.يوضح الجدول التالي استخدام القالب الموصى به لنظام التفاعل 50 ميكرولتر.
| الحمض النووي | كمية |
| الجينومية | 1 نانوجرام -1 ميكروجرام |
| البلازميد أو الفيروسي | 1 صفحة -1 نانوغرام |
2) قد يتراوح التركيز الأمثل لـ Taq DNA Polymerase من 0.25 ميكرولتر إلى 1 ميكرولتر في التطبيقات المتخصصة.
رد فعلبرنامج
| خطوة | درجة حرارة(درجة مئوية) | وقت | دورات |
| تمسخ الأوليa | 95 درجة مئوية | 5 دقائق | - |
| تمسخ | 95 درجة مئوية | 15-30 ثانية | 30-35 دورة |
| التلدينب | 60 درجة مئوية | 15 ثانية | |
| امتداد | 72 درجة مئوية | 1 كيلو بايت/دقيقة | |
| التمديد النهائي | 72 درجة مئوية | 5 دقائق | - |
ملحوظات:
1) تعتبر حالة تمسخ الطبيعة الأولية مناسبة لمعظم تفاعلات التضخيم ويمكن تعديلها وفقًا لتعقيد بنية القالب.إذا كان هيكل القالب معقدًا، فيمكن تمديد وقت ما قبل التسخين إلى 5 - 10 دقائق لتحسين تأثير التسخين الأولي.
2) يجب تعديل درجة حرارة التلدين وفقًا لقيمة Tm للمادة التمهيدية، والتي يتم ضبطها عمومًا على 3 ~ 5 ℃ أقل من قيمة Tm للمادة التمهيدية؛بالنسبة للقوالب المعقدة، من الضروري ضبط درجة حرارة التلدين وتمديد وقت التمديد لتحقيق التضخيم الفعال.
